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第26卷第6期 华 中 农 业 大 学 学 报 Vo1．26 No．6 2007年 12月 Journal of Huazhong Agricuhural University Dec．2007。839～843 锯缘青蟹血细胞酚氧化酶活力及主要影响因子 潘清清 。 钱 冬。’ 刘 问。 邱庆连。 胡大雁 。 陈昌福 (”华中农业大学水产学院，武汉430070； 浙江省淡水水产研究所，湖州313001) 摘要 研究了温度、pH、促进剂、抑制剂、菌体及免疫多糖对锯缘青蟹 (Scylla serrata)血细胞裂解物 (HLS)酚氧化酶(phenoloxidase，PO)活力的影响。试验结果表明：锯缘青蟹PO的最适作用温度为25℃，最适 pH值为7．8；SDS、Ca 、M 均可提高PO的活力，其中Ca 和M ’。的最佳反应浓度分别为50 mmol／I 和 150 mmol／L，SDS的最佳反应浓度为2．5 mg／mI ；叠氮钠、二乙基二硫代氨基甲酸钠、乙二胺四乙酸、cu 对PO 活力有不同的抑制作用。发现拟态弧菌SS060818、气单胞菌MrM0602、金黄色葡萄球菌ATCC25923、溶壁微球 菌AS1．634对PO有激活作用，其中拟态弧菌和气单胞菌激活作用显著，金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌对PO有 弱激活作用；肽聚糖、拟态弧菌脂多糖粗提物可显著提高PO活力，肽聚糖、脂多糖的最佳激活浓度分别为2．7 mg／mL、0．5 mg／mL。 关键词 锯缘青蟹；酚氧化酶；血细胞裂解物；影响因子 中图法分类号 Q 554：Q 959．223 ．63 文献标识码 A 文章编号 1000—2421(2007)06—0839—05 锯缘青蟹(Scylla serrata)简称青蟹，盛产于东 场，平均规格为(160--4-_30)g／只。暂养于48 cm× 海、南海，是经济价值较高的主要海水养殖种类。近 37 cmX29 cm塑料箱中，试验期间水温为(20±2)℃， 年来，我国养殖青蟹发生了严重的疾病，给青蟹养殖 盐度为1．95 。 业造成了巨大的经济损失，成为青蟹产业发展的主 1．2 试验仪器及材料 要威胁。 721分光光度计为上海分析仪器二厂产品；超 酚氧化酶 (phenoloxidase，PO)是甲壳动物防 声波破碎仪 (DF-6P3)为宁波经济技术开发区电子 御系统的重要组成部分，在识别异物、促进血细胞吞 仪器公司产品；PO测定用底物3，4一二羟苯丙氨酸 噬、产生杀灭和排除异物等免疫功能方面发挥重要 (L-3，4-dihydroxyphenylalamine，L—DOPA)为Sig— 的作用口]。酚氧化酶活力与机体免疫及抗病力有密 ma公司产品；十二烷基磺酸钠 (sodium dodeeyl 切的关系口]，我国学者先后开展了中国对虾、日本对 sulfate，SDS)、二甲胂酸钠 (sodium cacodylate)分 虾、凡纳滨对虾、中华绒螯蟹等重要水产经济养殖甲 别购自Uniche和Fluka公司；其余所用试剂均为国 壳类的酚氧化酶研究l3 ]，并用于养殖品种的抗病力 产分析纯级。 和免疫功能评价。对青蟹酚氧化酶的研究目前尚未 拟态弧菌(Vibrio minicus)SS060818和气单胞 见报道。为开展锯缘青蟹抗病力研究，为青蟹免疫 菌(Aeromonas spp．)MrM0602株为笔者所在实验 增强剂的制备提供依据，笔者通过青蟹血细胞裂解 室分离自发病青蟹和罗氏沼虾；金黄色葡萄球菌 物研究了青蟹酚氧化酶的活力及主要影响因子的作 (Staphylococcusaureus)ATCC2592购自杭州天和 用，现将结果报道如下。 微生物试剂有限公司；溶壁微球菌(Micrococcus ly— soleikticus)AS1．634购自中国科学院微生物研究 1 材料与方法 所菌种保藏中心；肽聚糖 (peptidoglycan，PG)由中 1．1 试验动物