重组工程法构建德胺糖生物合成基因簇的表达载体.pdfVIP

中国抗生素杂志2007年 12月第 32卷第 12期 ·719· 文章编号：1001—8689(2007)12-0719-04 重组工程法构建德胺糖生物合成基因簇的表达载体 朱蕾 谢峰 尚广东 (南京师范大学生命科学学院 江苏省生物多样性与生物技术重点实验室， 南京210097) 摘要： 德胺糖(desosamine)是次级代谢产物来源的微生物药物中的一个重要的糖基团。为构建德胺糖生物合成基因簇的异源 表达体系，本研究运用重组工程技术一步法从黏粒中克隆了德胺糖的生物合成基因簇的两个转录单元，重组效率高达100 。本方 法避免了常规克隆手段的烦琐、耗时、针对长DNA片段的PCR易发生碱基突变等缺点。进一步，将两个转录单元分别置于来源于 天蓝色链霉菌的pacI／pactIII双向启动子的控制下并克隆至链霉菌的游离型和整合型表达载体上。本工作为探索德胺糖生物合成 基因簇在异源宿主菌中表达、德胺糖与多种糖苷底物偶联以创制新化合物奠定了基础。 关键词： 德胺糖； 生物合成基因簇； 重组工程 中图分类号：Q78 文献标识码：A Construction of desosamine biosynthetic gene cluster through recombineering Zhu Lei， Xie Feng and Shang Guang—dong (Key Lab of Biodiversity andBiotechnology of Jiangsu Province， College of Life Sciences，NanjingNormal University， Nanjing 210097) ABSTRACT Desosamine is an important sugar group of microbial medicines originated from secondary metabolites．Two transcriptional units of desosamine biosynthetic gene cluster were directly cloned from the cosmid via genetic recombineering and the recombination efficiency is as high as 1 00 ．This cloning strategy avoids the tedious，time consuming，and error—prone for long fragment PCR．The desosamine gene cluster was further put under the pactI／pactIII bidirectional promoter from the Streptomyces coelicolor，and cloned into the streptomyces free state expression vector and integrative vector，respectively．This work sets the stage for exploring of the heterologous expression of desosamine biosynthetic gene cluster and the coupling of desosamine with various glycon substrates． KEY WORDS Desosamine； Biosynthetic gene cluster； Recombineering 微生物药物分子生物学的迅速发展，使得对负责 的“沉默基因簇”以重组工程手段克隆后，转化至假单 微生物药物的生物合成基因簇的操纵成为一条可供选 胞菌