新编动物细胞培养和核移植技术.pptVIP

* * * 动物细胞培养 动物细胞融合 生产单克隆抗体 动物细胞核移植 动物细胞工程常用技术 　　其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 一、动物细胞培养 阅读课文P44----P47相关内容 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 1、动物细胞培养的概念 从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 原理是细胞增殖 （有丝分裂） 。 分离组织（幼龄动物） 分散细胞（胰蛋白酶） 原代培养（细胞增殖） 传代培养（细胞增殖） 分装 2. 动物细胞培养的操作过程 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 有关概念 接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 50代以后 失去接触抑制 接触抑制 部分细胞突变，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。 有关概念 原代培养： 指将要培养的动物细胞取出后,先用胰蛋白酶等使组织分散成单个细胞,然后配制成一定浓度的细胞悬浮液，再将该悬浮液放入培养瓶中培养。 (分装之前，10代以前) 传代培养： 将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 (分装后继续培养，10代以后) 细胞株： 原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系： 细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 有关概念 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 3、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 成块的组织不利培养,分散了做成细胞悬浮液利于培养 先用剪刀剪碎组织,后用胰蛋白酶处理。 思考: 1、为什么选用动物胚胎或幼年动物的组织、器官做动物细胞培养的材料? 因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛, 分裂能力强 6、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质 不能，因为两者的最适pH不同 5、如何打破接触抑制？ 需要重新用胰蛋白酶处理,然后分别继续培养,让细胞 继续增殖 4、培养瓶中的细胞培养到什么时候就不再 分裂、增殖？ 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞分裂 就会停止分裂增殖，这种现象叫接触抑制。 8、如何理解原代培养和传代培养？ 9、传代培养的细胞能一直传代下去吗？ 10、有些细胞为何能一直传下去？ 7、动物细胞培养瓶内表面为何要光滑、无毒？ 上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养 不能,一般传至10代就不易传下去了 这些细胞发生突变，朝着癌细胞方向发展 易于培养细胞贴壁，进行生长增殖 11、人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？ 保存10代以内的细胞，因为10－50部分细胞的细胞核型可能发生变化，有少部分还发生突变向癌细胞方向发展 12、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬液 10代细胞 50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液 （分解细胞间的蛋白） 原代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 剪碎 细胞株 细胞系 动物组织细胞间隙中含有一定量蛋白质 遗传物质未改变 遗传物质已改变 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？ 多数组织细胞必须在固定的表面上生长和分裂。 随