饲料中粗蛋白质测定.docVIP

畜禽生产与疾病防治 畜禽营养与饲料加工技术 饲料中粗蛋白质的测定 一、实验目的 1.了解饲料中粗蛋白质的测定方法的适用范围、仪器设备的使用方法 2.掌握饲料中粗蛋白质的测定的原理和方法 3. 学会饲料中粗蛋白质的测定的实验操作及结果的分析 二、适用范围 本法适用于配合饲料和单一饲料。 三、原理 本法采用凯氏半微量定氮法，其原理是试样在催化剂作用下，用浓硫酸破坏饲料中的有机物质，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏，使氨逸出，同时用硼酸溶液吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红—溴甲酚绿混合作指示剂，用盐酸标准溶液滴定，测出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用系数6.25计算），计算出这一数据占样品质量的百分比，以此作为粗蛋白质的含量。 本法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，在测定结果中除蛋白质外，还有氨基酸、酰胺、铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等，故以粗蛋白质表示之。 四、仪器设备 1.实验室用样品粉碎机或研钵。 2.分样筛 孔径0.45 mm(40目)。 3.分析天平 感量0.000 1 g。 4.凯氏烧瓶 100 mL。 5.凯氏蒸馏装置 半微量水蒸气蒸馏式 6.容量瓶 100 mL。 7.移液管 10 mL。 8.锥形瓶 150 mL或250 mL。 9.滴定管 25 mL。 10.其他 试剂瓶、洗瓶、消煮炉或电炉。 五、化学试剂 1.硫酸(GB 625) 分析纯，含量为98%，无氮。 2.混合催化剂 O．4g硫酸铜，5个结晶水(GB 665)，6g硫酸钾( HG3 -920)或硫酸钠(HG3-908)，均为分析纯，磨碎混匀。 3.氢氧化钠(GB 628) 分析纯，配成40%氢氧化钠溶液。 4.硼酸(GB 628) 分析纯，配成2%硼酸溶液。 5.混合指示剂 甲基红(HG3-958)0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿(HG3 -1220)0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。 6.盐酸标准溶液 硼砂或无水碳酸钠标定 0.1 mol/L盐酸(HCl)标准溶液：8.3 mL盐酸(GB 622)，分析纯，注入1000 mL蒸馏水中。 0.02 mol/L盐酸( HCl)标准溶液：1.67 mL盐酸(GB 622)，分析纯，注入1000 mL蒸馏水中。 7.硫酸铵(GB 1396) 分析纯，干燥。 六、测定步骤 1．消化 准确称取试样0.2～1 g(含氮量5～80 mg)准确至0.000 2 g，无损失地放入凯氏烧瓶中，加入6.4 g混合催化剂，与试样混合均匀，再加12 mL硫酸和两粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于消煮炉或电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃），直至溶液呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。 2．蒸馏 将上述消化液冷却，加入20 mL蒸馏水，转入100 mL容量瓶中，洗净，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20 mL、2%硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。用移液管准确移取10 mL试样分解液，注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10 mL、40%氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，并在入口处加水密封，防止漏气。加热蒸馏4 min，降下锥形瓶，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1 min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 3．滴定 蒸馏后的吸收液立即用0.1 mol/L或0.02 mol/L盐酸标准液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。 4.空白测定 在测定饲料样品中含氮量的同时，应做一空白对照测定，即各种试剂的用量同，但不加样品，这样可以校正因试剂不纯所发生的误差。 消耗0.1 moI/L盐酸标准溶液的体积应不超过0.2 mL。消耗0.02 mol/L盐酸标准溶液的体积应不超过0.3 mL。 七、结果计算 1．计算公式 饲料中粗蛋白质的质量分数(%)＝（V3－V0）× c× 0.0140× 6.25×(V1/V2) ×（100/m) 式中：m——样品的质量，g； V1——试样分解液总体积，mL； V2——试样分解液蒸馏用体积（mL）； V3——试样滴定时所需酸标准溶液的体积（mL）； V0——空白滴定时所需酸标准溶液的体积(mL)； C——盐酸标准溶液的浓度(mol/L)； 0.0140——每ml HCl标准溶液相当于N的克数； 6.25——氮换算成蛋白质的平均系数。 2．重复性 每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋白质含量在25%以上，允许相对偏差为1%。 当粗蛋白质含量在10