2.1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptVIP

活菌计数技术广泛应用于土壤含菌亮的测定、食品卫生和水源污染度的检验等方面。如果你赶兴趣，可以从下列项目中选做一个。 1、空气中微生物总数的检测 2、水中细菌总数的检测 3、牛奶中细菌的分离与计数 4、土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数 P26练习：2： 反刍动物，如牛和山羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多能以尿素作唯一氮源。请你设计一个实验，从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。 瘤胃中的微生物多为厌氧菌，因此分离出其中的分解尿素的微生物，除了准备以尿素作为唯一氮源的选择培养基外，还需参照厌氧微生物的培养条件进行厌氧培养。 操作提示：作好标记 本实验使用平板和试管较多，为避免混淆，实验时要对培养皿作好标记，如注明培养基种类、培养日期、稀释度、培养物等。 （四）取样涂布： 1、培养不同的微生物需要不同的温度和时间：（1）细菌：30～37℃培养1～2d （2）放线菌：25～28℃培养5～7d （3）霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 本实验中菌落计数时，可每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 2、一定的培养条件下（相同的培养基、温度及时间）同种微生物菌落特征（形状、大小、隆起程度和颜色等）稳定。 （五）微生物的培养与观察： 微生物的培养与观察 1、结合对照分析：是否有杂菌污染和筛选出一些菌落？ 对照培养皿中无菌落生长，则培养基无污染；牛肉膏蛋白胨培养基菌落数明显大于选择培养基菌落数，说明选择培养基已筛选出了一些菌落 （若有杂菌污染，菌落数偏高，且菌落特征不稳定单一；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。） 三、结果分析与评价 2、是否获得某一稀释度下菌落数在30—300个菌落的平板，在这一稀释度下是否至少有两个平板菌落数接近（稀释操作是否成功）？ 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30—300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？ 若选取同种土样，统计结果应该接近，如相差太远，则需要分析原因。 三、结果分析与评价 四、操作提示 （一）无菌操作 1、取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌； 2、应在火焰旁称取土壤，在火焰附近倒入锥形瓶，赛好棉塞； 3、稀释土壤溶液的每一步都要在火焰旁进行； （一）无菌操作 （二）做好标记 （三）制定计划 （二）做好标记 1、本实验使用平板和试管多，为避免混淆，实验时对培养皿作好标记，如注明培养基种类、培养日期、稀释度、培养物等。 2、系列稀释时：将已进行过稀释操作的试管，按稀释度递增的顺序，依次放在试管架的另一行； （三）制定计划： 对于耗时较长的实验，需要事先制定计划，以便于提高工作效率，操作时有条不紊，例如在本实验中： 1、第一天：实验器材灭菌、制备培养基等； 2、第二天：稀释涂布平板的操作； 3、第三、四、五天：实验结果的观察记录 本课题对能分解尿素的细菌进行了初步的筛选，这只是纯化菌种的第一步。对分离菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。 1、通过检测培养基pH的变化来判断细菌是否分解尿素的化学反应是否发生： 细菌脲酶将尿素分解成氨，氨使培养基碱性增强，PH升高，因此可通过检测培养基pH的变化来判断细菌是否分解尿素的化学反应是否发生 五、课题延伸 2、指示剂检测鉴定: 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 五、课题延伸 六、相关链接 课后练习 本课题知识小结: 1.使用选择培养基的目的是（ 　） A.培养细菌　　 B.培养真菌　　 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3　　 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素 实践训练 C D 七、例题解析 3.下列说法不正确的是（ 　） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因