一氧化氮在埃索美拉唑对大鼠胃黏膜损伤保护中的作用论文.docVIP

　　一氧化氮在埃索美拉唑对大鼠胃黏膜损伤保护中的作用论文 乐桥良张志坚林克荣 【摘要】目的：探讨一氧化氮（NO）在埃索美拉唑对大鼠胃黏膜损伤保护中的作用.方法：在乙醇诱导大鼠胃黏膜损伤前，预先给予埃索美拉唑（20mg/kg）灌胃，L硝基精氨酸甲酯（LNAME，4mg/kg）、L精氨酸（250mg/kg）及D精氨酸（250mg/kg）静脉注射.采用激光多普勒血流计（LDF）测定胃黏膜血流量（GMBF），镉粒还原和比色法测定胃黏膜和血浆NO-2/NO-3含量，并观察了胃黏膜损伤指数（UI）、溃疡坏死组织和中性粒细胞浸润严重程度的变化.结果：与模型损伤组比，埃索美拉唑组大鼠UI降低（P 0.01），溃疡坏死组织和中性粒细胞浸润程度减轻（P 0.01）.预先用LNAME处理后.freeleprazole）是人工合成的新一代质子泵抑制剂（protonpumpinhibitor，PPI），对酸分泌有显著的抑制作用［1］；同时对胃黏膜具有保护作用［2-4］.一氧化氮（nitricoxide，NO）是扩血管物质，可增加胃黏膜血流量（GMBF），对胃黏膜具有保护作用［5］.我们研究NO在埃索美拉唑对大鼠胃黏膜损伤保护中的作用，探讨埃索美拉唑对胃黏膜保护作用的可能机制. 1材料和方法 1.1材料 埃索美拉唑是阿斯利康公司提供的产品，L硝基精氨酸甲酯（NωnitroLargininemethylester，LNAME）为Sigma公司产品，L精氨酸、D精氨酸为上海华美工程公司产品.镉粒为上海亭新工厂产品，甘氨酸、亚硝酸盐为上海试剂一厂产品，硫酸铜、N1奈乙胺盐酸盐为上海试剂三厂产品，对氨基苯磺酸为上海山海科技研究所产品，硫酸、硫酸锌、氢氧化钠、酚红为上海试剂二厂产品.雄性SD大鼠（上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供），体质量200~260g，实验前禁食、不禁水24h.XHF1高速分解器为上海金山生化仪器厂产品，TG328B型分析天平为上海天平仪器厂产品，801型离心机为上海手术器械厂产品，724微机型可见分光光度计为上海光学仪器厂产品，眼科手术器械一套.激光多普勒血流计（LDF），LDFⅢ型，南开大学制造，技术参数如下：HeNe光源，功率2mE组，用埃索美拉唑灌胃前20min，ivLNAME（4mg/kg）.Ⅴ组：L精氨酸（Larginine）组，在ivLNAME15min前，ivL精氨酸（250mg/kg）.Ⅵ组：D精氨酸（Darginine）组，在ivLNAME15min前，ivD精氨酸（250mg/kg）.Ⅰ～Ⅳ组又各分成2小组，每小组11只，其中1组用于胃酸、GMBF、胃黏膜和血浆NO-2/NO-3测定，另1组用于胃黏膜损伤指数（ulcerindex，UI）判定和组织学观察．对照组给予等量的生理盐水．取胃液2mL，加酚红指示剂2滴，黄色表示有胃酸存在，用0.1mol/L氢氧化钠滴定至粉红色，所耗氢氧化钠(mL)×50，即为胃酸浓度（mmol/L），并换算成pH. 1.2.1GMBF测定 采用LDF测定GMBF，开机预热30min调出LDFⅢGMBF测定程序，从胃大弯处作一小切口，用LDF的探头轻轻垂直接触胃黏膜表面，待血流稳定后，在胃体大小弯、胃窦大小弯取4点测定GMBF，取其平均值，以激光多普勒信号电压值（mV）表示血流量的相对数值. 1.2.2NO-2/NO-3含量测定 用钝性刀片刮取胃黏膜，组织匀浆，离心后取上清液,-20℃贮存待测；取外周血2mL，EDTA抗凝，离心后取上清液，-20℃贮存待测；NO-2/NO-3含量采用镉粒还原和比色法测定［6］. 1.2.3UI判定 按Guth标准计算UI，处死动物，取出胃及十二肠，沿大弯侧剪开后，展平，按溃疡或糜烂面积大小给予计分：斑点状糜烂为1分，糜烂 1mm为2分，糜烂介于1~2mm之间为3分，糜烂为2~4mm为4分，糜烂 4mm为5分. 1.2.4组织学观察 全胃用40g/L甲醛固定，制成石腊切片，HE染色光镜下观察，评定标准如下：①坏死物质：未见为0，仅在溃疡底面边缘有少许为（+），薄层覆盖整个溃疡底为（），厚层覆盖为（）.②中性粒细胞浸润：未见为0，偶见（+），明显（），介于后两者之间为（）. 统计学处理：对计量资料，多组之间比较采用方差分析，组间两两比较采用SNKq检验，组间方差不齐时，采用KruskalE组与损伤模型组比无统计学差异（P 0.05），而比埃索美拉唑组升高（P 0.01）；L精氨酸组与损伤模型组和LNAME组比均降低（P 0.01），D精氨酸组与损伤模型组和LNAME组比均无统计学差异，而比埃索美拉唑组升高（P 0.01，表1）. 2.