分光光度法细菌浓度11月18日.docVIP

用分光光度法粗测金黄色葡萄球菌菌悬液的浓度 实验目的： 通过对同一菌液同时测吸光度值与平板菌落计数，将两个结果做标准曲线。标准曲线做出后，通过测吸光度值间接反应菌悬液的浓度，用于指导菌悬液的制备。 实验设备： U-2900 型分光光度计 波长为600nm 比色皿厚度： cm 实验材料：空白对照液：0.9%无菌氯化钠溶液 稀释液：0.9%无菌氯化钠溶液 营养肉汤培养基 实验菌种：金黄色葡萄球菌（新鲜培养物） 实验步骤： 1.将金黄色葡萄球菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中，在30～35℃恒温培养箱中培养18～24h。 2. 在无菌阳性室按无菌操作将培养后的金黄色葡萄球菌用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成不同浓度的菌悬液 。具体为分别吸取营养肉汤培养液0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml，0.6ml，0.7ml到10ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，稀释成7种不同浓度的原始菌悬液。序号分别为1-7号。 2.1平板菌落计数法测活菌浓度 取14个营养琼脂培养基平板，分别从每个原始菌液中，取0.2ml的菌悬液，用平板涂布法，涂于平板中，标明序号，每个稀释度涂2块平板. 37℃培养箱培养72 h后，可见菌落形成，选取菌落数在30~300间的平板进行计数，每组稀释度相同的平板取平均值作为菌落数. 计算出原菌液细菌浓度，作为细菌菌液的标准浓度。 2.2分光光度法测菌悬液吸收值 同时将以上5种原始菌液在波长为600nm下测定吸光度。用0.9%无菌氯化钠溶液作为空白对照，记录各原始菌液的吸光度值。 表一：平板菌落计数与吸光度值对比记录 序号 吸取原培养液的量（ml）---原始菌液 加样到平板上的量（ml） 稀释倍数 平板计数菌落数（cfu） 吸光度值 原始菌液的含菌量（cfu） 1 0.1 0.2 5倍 0.018 2 0.2 0.2 5倍 0.029 3 0.3 0.2 5倍 0.049 4 0.4 0.2 5倍 0.058 5 0.5 0.2 5倍 0.076 6 0.6 0.2 5倍 0.082 7 0.7 0.2 5倍 0.102 3 结果计算 对同一菌液同时测吸光度值与进行平板菌落计数，将平板菌落计数所得菌液浓度作为细菌标准浓度c. 根据所测出A值以及相对应的标准浓度c值，作出标准曲线。