植物多酚类化合物抗肿瘤药物筛选及作用机制研究.pdfVIP

3.2.8TUNEL 染色检测细胞调亡27 3.2.9 琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡28 3.2.10WesternBlot检测化合物对 pErk的影响28 四 结果与讨论30 4.1MTT 比色法体外抗肿瘤活性初步筛选结果30 4.1.1 部分供试化合物对 PC3细胞 72h体外抑制活性初步筛选结果30 4.1.2 部分化合物对 Bcap37细胞 72h体外抑制活性初步筛选结果31 4.1.3 部分化合物对 BGC823细胞 72h体外抑制活性初步筛选结果32 4.2CCK-8 法和 MTT 法在 PC3细胞增殖检测中的比较研究32 4.2.1 最佳测定时间的确定32 4.2.2 最佳检测波长的确定33 4.2.3 细胞数量与吸光度 OD值的关系34 4.2.4 阿霉素（ADM）对 PC3细胞的增殖影响35 4.3AO/EB双染检测化合物对 PC3细胞的毒性和凋亡诱导作用37 4.4 以 PC3细胞为研究对象对化合物 2008001和 2008003作用机理的初步研究39 4.4.1MTT 法检测化合物 2008001和 2008003对 PC3细胞的体外抑制活性39 4.4.2化合物 2008001和 2008003对 PC3细胞的形态学影响40 4.5LDH 活性测定检测化合物对细胞膜通透性的影响42 4.6Hoechst33258染色检测化合物对 PC3细胞凋亡诱导作用42 4.7TUNEL 法检测 2008003对 PC3细胞的凋亡诱导作用43 4.8 琼脂糖凝胶电泳检测 2008003对 PC3细胞凋亡诱导作用44 4.9WesternBlot检测化合物对 PC3细胞 pErk1/2磷酸化的影响45 五 结论47 致 谢49 参考文献50 附录56 原 创 性 声 明57 贵州大学 2009届硕士研究生论文 摘 要 植物多酚具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌等多种生物活性。目前，以植物多酚为 先导化合物进行结构优化，合成活性更高的植物多酚类化合物已成为国内外研究 的热点。 本文对课题组设计合成的植物多酚类化合物进行抗肿瘤生物活性测定及作 用制初步研究，为化合物的优化设计和进一步开发提供实验依据。具体研究内容 包括： 1. 以雄性激素非依赖性人前列腺癌 PC3细胞为模型，采用 MTT比色法对课 题组合成的植物多酚类化合物进行了体外抗肿瘤活性筛选，从中筛选出植物多酚 类化合物 2008001、2008002、2008003、2008095、2008439、2008440、2008441 和 2008443，在 10 μmol/L 浓度下对 PC3 细胞作用 72 h 的体外抑制率分别为 (88.5±2.4)%、(36.0±3.8)%、(68.4±5.8)%、(67.0±6.3)%、(29.1±10.4)%、(65.5±6.8)%、 (58.5±10.6)%和(82.2±6.3)%，对 PC3细胞作用 72h的 IC 值分别为 3.4µΜ、17.9 50 µΜ、3.5µΜ、14.1µΜ、22.9µΜ、3.7µΜ、14.4µΜ和 6.9µΜ。 2. 以 PC3 细胞为模型，探讨了 CCK-8 检测方法的最佳实验条件。CCK-8 的最佳检测波长为 450nm，最佳检测时间为加入 CCK-8试剂后 4小时，适宜检 2 5 测的细胞数量范围为 4×10 ~1×10 个。同时对 CCK-8法和 MTT比色法进行了 较为系统的比较，结果表明 CCK-8 法操作简便，灵敏度高，准确性好；是一种 优于 MTT法的检测细胞增殖活性的方法。 3. 对筛选出的植物多酚类化合物进行了作用机制初步研究。包括化合物对 肿瘤细胞形态学的影响、对肿瘤细胞膜通透性的影响、对肿瘤细胞凋亡特性和信 息传导特性的影响。结果表明植物多酚类化合物 2008001、2008002、2008095、 2008439、2008440、2008441和 2008443主要通过细胞毒作用发挥体外抗肿瘤活 性。2008003通过诱导 PC3细胞凋亡来发挥体外抗肿瘤活性。2008001、2008002、 2008003和 2008095不能通过 Erk1/2介导的信号途径