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甘蓝型油菜精氨酸脱羧酶基因的克隆及原核表达论文
1．2．3裂果相关基因研究………………………………………………．3
1．2．4雄性不育和育性恢复相关基因研究……………………………。4
1．3植物ADC基因的研究进展……………………………………………．．5
1．3．1植物ADC基因及编码蛋白的基本特性…………………………5
1．3．2
ADC基因的定位与编码蛋白的分布……………………………．6
1．3．3
ADC基因的表达特性………………………………………………7
1．4植物基因克隆的主要策略………………………………………………．7
1．4．1图位克隆…………………………………………………………．．7
1．4．2转座子标记法………………………………………………………8
1．4．3同源克隆…………………………………………………………．．9
1．4．4表达序列标签法…………………………………………………10
1．4．5差异表达基因克隆技术…………………………………………1l
第二章引言……………………………………………………………………13
2．1研究的目的与意义………………………………………………………13
2．2技术路线………………………………………………………………。13
第三章甘蓝型油菜ADC基因的克隆与序列分析……………………………15
3．1试验材料与试剂………………………………………………………。15
3．1．1材料…………………………………………………………………………………一15
3．1．2克隆载体与大肠杆菌感受态……………………………………15
3．1．3主要试剂…………………………………………………………．15
3．1．4主要仪器设备……………………………………………………15
3．1．5自配的主要化学试剂……………………………………………15
3．2实验方法………………………………………………………………．16
3．2．2彳DC基因保守区域的扩增………………………………………16
3．2．4彳DC基因cDNA
OI强扩增………………………………………19
3．2．5．,4DC基因cDNA全长的生物信息学分析方法…………………20
3．3结果与分析……………………………………………………………2l
3．3．1甘蓝型油菜ADC基因cDNA全长的克隆……………………21
3．3．2甘蓝型油菜ADC基因及编码蛋白的生物信息学分析………．．23
3．4讨论……………………………………………………………………………………………32
第四章甘蓝型油菜ADC基因的原核表达……………………………………．35
4．1试验材料与试剂…………………………………………………………．．36
4．1．1试验材料…………………………………………………………一36
西南大学硕士学位论文
4．1．2主要试剂…………………………………………………………．36
4．1．3主要设备…………………………………………………………．36
4．1．4自配主要试剂……………………………………………………36
4．2试验方法………………………………………………………………。37
4．2．1质粒DNA提取…………………………………………………一37
4．2．2表达目的基因蛋白的引物设计…………………………………．37
4．2．3
B以DCJ基因ORF序列加酶切位点扩增………………………38
4．2．4
pET30a(+)质粒和目的基因片段的双酶切………………………38
4．2．5酶切片段胶回收与连接…………………………………………．39
4．2．6菌液PCR与双酶切验证………………………………………．．39
4．2．7重组质粒转化BL21(DE3)及菌落PCR鉴定……………………39
4．2．8
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