肝癌患者肝脏中乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶活性变化.pdfVIP

摘 要 方法 1 人肝标本 收集正常人肝标本 74 例（主要为肝血管瘤患者），年龄 20～75 岁（中位 数为49 岁）。男性和女性分别为25 例和49 例，有吸烟史和饮酒史的分别为8 例和7 例。肝癌癌旁组织68 例，年龄29～75 岁（中位数为52 岁）。男性和女 性分别为 10 例和58 例，有吸烟史和饮酒史的分别为30 例和22 例。本试验方 案经郑州大学医学伦理委员会批准，受试者签署知情同意书。 2 ADH 和ALDH 的基因分型 采用DNA 提取试剂盒从肝组织中提取基因组DNA 。其中ADH1B rs1229984 （GA）及ADH1Crs698 （AG ）是通过PCR-RFLP 方式确定其基因型。ADH1C rs2241894 （AG ）、ALDH2 rs671 （AG ） 及ALDH2 r （CT）是 MassARRAY 分子量阵列技术（Sequenom MassARRAY ）确定受试者的基因型。 3 人肝匀浆的制备 采用离心法制备人肝匀浆，Bradford 法测定肝微粒体蛋白含量。 4 总ADH 、ADHI 、ADHII 及总ALDH 、ALDH2 酶活性的测定 分别以亚硝基二甲基苯胺（p-nitrosodimethylaniline ，NDMA ），4- 甲氧基-1- 萘 甲 醛 （ 4-methoxy-1-naphthaldehyde ） ， 6- 甲 氧 基 -2- 萘 甲 醛 （4-methoxy-2-naphthaldehyde ），6- 甲氧基-2-萘甲酸，乙醛为总ADH 、ADHI 、 ADHII ，总ALDH 、ALDH2 的底物，加入相应的辅酶（NAD 或NADH ），肝匀 浆上清，缓冲液，通过荧光或紫外的方法在一定波长下检测相应物质的吸收。 通过计算单位时间内吸光值的变化值，并除以相应的蛋白浓度即可得到转化率 的值。 5 统计方法 采用SPSS17.0 统计软件对各项数据资料进行统计学分析。酶活性数据进行 正态性检验，对于非正态分布的，采取非参数检验进行相关分析。检验水准 α 为0.05 。 II 万方数据 摘 要 结果 1 肝匀浆上清总蛋白含量 肝癌癌旁组织肝匀浆上清的总蛋白含量中位数和范围分别为 81.68 (45.04-107.60)mg/g liver，而正常肝脏组为89.04(40.48-114.08) mg/g liver，肝癌 癌旁组织肝匀浆上清的总蛋白含量显著低于正常肝组织。 2 酶活性 2.1 正常肝标本总ADH 、ADHI 、ADHII 及总ALDH 、ALDH2 酶活性 正态性检验结果表明，人肝匀浆总ADH 、ADHI 、ADHII 及总ALDH 、ALDH2 酶活性参数呈非正态分布，因此本实验采用非参数检验进行统计分析。74 例人 肝人肝匀浆总ADH 、ADHI 、ADHII 及总ALDH 、ALDH2 酶活性中位数和范围 分别为1.81 （0.16~72.12 ）、0.44 （0.09~1.26 ）、0.18 （0.03~0.53 ）、0.12 （0.01~0.31 ）、 -1 -1 9.21 （0.85~18.35 ）pmol·min ·mg protein ；差异倍数分别为447.9 、14.4 、 16.0、 2 1.0、21.6 倍。结果显示，总ADH 、ADHI 、ADHII 及总ALDH 、ALDH2 酶活 性呈现出较大的个体差异性。 2.2 肝癌癌旁标本