影响酶促反应的成分.docVIP

生物医药工程系《生物化学实验》预习报告 姓名 学号 专业 生物科学 班级 日期 实验名称 影响酶促反应的因素 实验目的 1．了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。 2．学习检定温度、pH、激活剂、抑制剂影响酶促反应速度的方法。 实验原理 在酶促反应中，酶的催化活性与环境温度、 pH有密切关系，通常各种酶只有在一定的温度、pH范围内才表现它的活性，一种酶表现其活性最高时的温度、 pH值称为该酶的最适温度、最适pH。 在酶促反应中， 酶的激活剂和抑制剂可加速或抑制酶的活性，如氯化钠在低浓度时为唾液淀粉酶的激活剂，而硫酸铜则是它的抑制剂。 本实验利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有不同的颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中各种因素对其活性的影响。 淀粉（遇碘呈蓝色）→紫色糊精(遇碘呈紫色)→红色糊精(遇碘呈红色)→无色糊精 (遇碘不呈色)→麦芽糖(遇碘不呈色)→葡萄糖(遇碘不呈色)。 所以淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断，以此反映淀粉酶的活性，由此检定温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。 仪器及材料（型号、规格、数量等） 1、唾液（吃食前的） 2、试管1.5cm×15cm(×13) 3、吸量管1.0 mL（×12）、2.0 mL（×5）、白瓷板6孔。 实验试剂（配制方法、数量多少、用途） 1、0.1%的淀粉液：称取可溶性淀粉0.1g，先用少量水加热调成糊状，再加热水稀释至100ml。 2、0.1%的蔗糖溶液：0.1g蔗糖溶于100ml蒸馏水。 3、本尼迪特试剂：称取85g柠檬酸钠及50g无水碳酸钠，溶解于400ml蒸馏水中。另溶解边搅，如有沉淀可过滤。此混合液可长期使用。 4、1%的淀粉溶液：将1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至100ml。 5、0.2mol/L NaHPO4溶液：称取35.6gNa2HPO4·2H2O溶解，最后定容至1000mL。 6、0.2mol/LNaH2PO4溶液：称取27.6gNaH2PO4·H2O溶解，最后定容至1000mL。 7、1%氯化钠溶液:1gNaCl溶于100ml蒸馏水。 8、1%硫酸铜溶液：1gCuSO4溶于100ml蒸馏水。 9、1%硫酸钠溶液：1gNa2SO4溶于100ml蒸馏水。 10、碘化钾—碘溶液：于2%碘化钾溶液中加入碘至淡黄色2%的KL溶液配制：称取KI 2g溶于100ml蒸馏水中 实验步骤 酶的专一性 取干净试管4只，按P166表35加入试剂并操作。 温度对酶活力的影响。 取干净试管5支，按P167表36加入试剂并操作。 再向各试管加碘化钾--碘试剂2滴，摇匀后观察各管颜色。 pH对酶活力的影响 取干净试管5支，按P167表37加入试剂并操作。 加酶后，迅速混匀，置37℃水浴保温，每隔1min从3号试管中取溶液2滴加到已有碘化钾—碘试剂的白瓷板中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时，再向各试管加碘化钾-碘试剂2滴，摇匀后观察。找出最适pH. (四)激活剂和抑制剂对酶活力的影响 取干净试管4支，按P168表38编号并加入试剂。 加酶后，迅速摇匀，置37℃水浴保温，每隔30s分别取2滴反应液在白瓷板中，滴加1滴碘化钾-碘试剂，观察颜色变化。 结果计算公式（要求计算的） 无 实验注意事项 1．加入酶液后，要充分摇匀，保证酶液与全部淀粉液接触反应，得到理想的颜色梯度变化。 2．用玻棒取液前，应将试管内溶液充分混匀，取出试液后， 立即放回试管中一起保温。 疑难问题 1．什么是酶的最适温度、最适pH？ 它们是酶的特征物理常数吗？ 2．激活剂分几类? 氯化钠属哪种类型？ 硫酸钠对淀粉酶的活性有无影响？ 注：此表格若地方不够可自行调整。