广西莪术SSR-PCR反应体系优化和引物筛选研究.pdfVIP

第 卷第 期 湖北农业科学 Vol.55No.23 55 23 年 月 Dec.,2016 2016 12 Hubei Agricultural Sciences 广西莪术SSR-PCR反应体系优化和引物筛选研究 杨 妮1,苏伟敏 靳雅慧 王 建2, 2, 2 柳州市妇幼保健院药剂科 广西 柳州 广西中医药大学药学院 南宁 ﹙1. , 545000；2. , 530001﹚ 摘要 以广西莪术 嫩叶为材料 采用单因素和正交试验设计 : (Curcumakwangsiensis S.G.Lee etC.F.Liang) ， 建立和优化 反应体系和反应程序 对最适宜退火温度 进行筛选优化 对 对已公布的姜 SSR PCR ， (Tm) ， 17 黄属通用性引物进行扩增试验 筛选出多态性好条带清晰的引物 结果表明 建立了适合广西莪术 ， ， SSR 分析的反应体系和扩增程序 即在 体系中 模板为 包含 2+ 1× ， 15μL ，DNA 30ng/μL，3μL，Mix( DNTPMg 酶 为 为 引物为各 时 分析效果较好 扩增程序为 预变性 buffer Taq ) 5μL，ddH2O 6μL， 0.5μL ， ， 94℃ 5 变性 根据不同引物的退火温度复性 延伸 共 个循环 最后 延伸 min；94℃ 30s， 30s，72℃ 1.5min， 35 ； 72℃ 反应结束后 保存 同时筛选出在试验材料中能产生较清晰主带的引物共 对 初步验证了应 5min； ，4℃ 12 ， 用SSR分子标记分析在广西莪术遗传多样性的可行性 关键词 广西莪术 反应体系优化 引物筛选 : (Curcumakwangsiensis S.G.Lee etC.F.Liang)；SSR；PCR ； 中图分类号:R283.6；R282.5