09基因操作.ppt

地高辛标记的应用领域 地高辛系统能够安全高效地标记DNA, RNA或是寡聚核苷酸探针，这些探针可以被广泛地应用在： Southern blot，dot blot ； Northern blot ； Array ； Colony hybridization ； In situ hybridization ； ELISA。 /bbs/viewthread.php?tid=831 返回37页 ELISA的原理与技术 酶联免疫吸附试验(ELISA)的基本原理是免疫反应物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物，酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物，然后加进酶底物，经酶的催化或水解作用，无色底物产生颜色，用肉眼，分光光度计观察结果。  /%E5%8A%A8%E4%BF%9D%E7%BD%91/newshtml /z/keji/shiyanjishu/2011/0116/178755.html 返回37页 /index.php?doc-view-9554.html /experiment/dna/elements/2009/7754.html /pic-data/showtype.asp?typeid=14page=4 /k/531/d11z/d1j.htm /molbio/4be050ca-d8f7-44e3-a3a1-b868cb787f61-1033.html /pic/list.asp?page=22classid=337 /course/yxmyx/chapter18/18_3.htm 基因工程工业 最早应用基因工程生产人的蛋白质的方法是在细菌中表达人的胰岛素(1982)。　 基因工程生产人的胰岛素的方法如左下图所示。　 现已在细菌中生产10多种药品，例如表皮生长因子、人生长激素因子、干扰素、乙型肝炎工程疫苗等。 目前，酵母菌、植物悬浮细胞、植株和动物培养细胞均成功地应用于表达外源蛋白。 基因工程还应用于大肠杆菌生产人类生长激素。 “生物反应器” 鸡，牛，羊等动物的血液，尿液，乳汁等都可以成为不需“杀鸡取卵”的“生物反应器”。将“药物基因”，“疫苗基因”通过转基因技术转进这些动物，可使他们成为“制药厂”。 中国的转基因羊 世界上首只转基因猴 “生物反应器” 转基因兔 三只山羊均为有人凝血因子ＩＸ基因整合的转基因，右边一只已进入泌乳期且乳汁含有人凝血因子ＩＸ活性蛋白。（已获得五头与人凝血因子ＩＸ基因整合的转基因山羊，其中一头已分泌人凝血因子ＩＸ活性蛋白） 在上海奉新动物试验场，有一头与众不同的奶山羊，这头羊分泌的乳汁含有血友病人所需的凝血因子ＩＸ活性蛋白。这种蛋白经过特殊的提炼，将成为血友病人的治疗药物。 转基因鼠 利用转基因羊大量表达人类的抗胰蛋白酶 转基因牛（受精卵注射法） 可分泌人类生长因子Ⅸ的转基因羊“Polly” 小白鼠为转移有人类生长激素转基因鼠，右边为同胞鼠对照 可分泌人类生长激素转基因猪 酵母人工染色体（yeast artificial chromosome, YAC） 返回24页 /experiment/dna/elements/2009/7754_6.html 细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome，BAC） 细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome,BAC） 优点：能携带大片段DNA，约300kb。 在每个细胞中，一个载体分子能繁殖多个拷贝，高产DNA。 缺点：会出现插入片段在结构上的不稳定，导致克隆DNA部分的缺失或重排。为克服上述缺点，人们采用低拷贝数复制子载体，如，E coli中的F因子。此质粒含有2种基因（part A,? part B）。每个E coli能接受 300kbDNA片段。 返回24页 粘粒(cosmid vector) 粘粒(cosmid vector)（30～40kb） 是将质粒和λ噬菌体改建的一种载体。它含COS序列，插入一小plasmid –而得名Cosmid。改建后的粘粒含有λ噬菌体的复制起点和cos 末端。全长8kb。大片段外源DNA插入后，在体外包装进而被克隆。可包装30～45kb长的DNA片段，多用于基因文库构建。 λ-噬菌体(λphage) λ-噬菌体(λphage)是一种可在体外包装的细菌病毒,可高效感染大肠杆菌.λ-噬菌体DNA是线状双链DNA分子,全长约50kb,每条链各带12bp长的单链互补末端-粘末端(COS序列)。进入宿主细胞后不久，COS序列碱基配对环化。改建后的λ噬菌体发展了多种较大型的克隆载体，如： 1、置换λ载体 – 溶解途径?? 载体和外源DNA