微生物标准操作规程三9.docVIP

XXX人民医院检验科微生物室 标准操作文件 文件编号：JY-WSW-SOP-007 版本号：2007 第1次修改 编写者：XXX XXX 审核者：XXX 修订日期：2012年1月15日 页码：第 1 页 共 2 页 霍乱弧菌检验标准操作规程 1．概述 霍乱弧菌可分为古典生物型和EL-Tor生物型；根据菌体抗原(即O抗原)又可分为155个血清群，其中O1血清群和O139血清群能引起霍乱的发病和流行，是霍乱的病原菌。 2．标本类型 粪便标本。 3．鉴定 3.1 形态与染色 革兰阴性，菌体弯曲呈弧形或逗点状。 3.2 培养特性 在TCBS琼脂平板上呈黄色的菌落。在双氢链霉素洗衣粉琼脂平板上形成中心呈灰褐色的菌落。 3.3 生化反应 氧化酶试验阳性；发酵葡萄糖、蔗糖、甘露醇，不发酵乳糖和L阿拉伯糖；动力、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、霍乱红、硝酸盐还原和黏丝试验均阳性；精氨酸双水解酶试验阴性。 3.4 鉴别要点 3.4.1 与气单胞菌属、邻单胞菌属的鉴别见表5—41。 表5—41弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属鉴别的关键性试验 试验 霍乱弧菌拟态弧菌 气单胞菌属 邻单胞菌属 O/129敏感试验（150ug） S R S 氨苄西林（10ug） S R R 黏丝试验 + - - 肌醇 - - + 精氨酸 - + + 注：“+”为90％以上菌株阳性，“一”为90％以上菌株阴性，“s”为敏感，“R”为耐药 3.4.2 确诊O1群霍乱弧菌必须具备的条件 ①涂片为革兰阴性弧菌或杆菌。②TCBS等选择培养基上典型的菌落特征。③动力试验阳性，符合生化特性。④O1群霍乱弧菌诊断血清凝集试验阳性。 3.5操作步骤 3 5.1 在碱性蛋白胨水(pH 8.6)中，37℃培养6～8小时后转种TCBS平板。 3.5.2 玻片凝集试验 从TCBS琼脂平板或双氢链霉素洗衣粉琼脂平板上挑取可疑菌落，与霍乱多价诊断血清做玻片凝集试验，以生理盐水做阴性对照，诊断血清凝集、生理盐水不凝者为阳性。做初步鉴定试验后，将此高度怀疑菌送疾病预防控制中心(CDC)做最后鉴定。 4．药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100一$20必威体育精装版版本文件。 5．质量控制 见《质量管理程序》。 6．检验结果解释与分析 初次分离时采用pH 8.6的碱性蛋白胨水增菌，6～8小时，液体呈均匀混浊，表面形成菌膜。根据O1群菌其O抗原中的ABC因子，又可进一步将其分为小川(AB)、稻叶(AC)和彦岛(ABC)等3个血清型；还可根据其产毒基因的有无和对人的侵袭力，划分为流行株和非流行株，流行株才是霍乱真正的病原菌。部分菌株不被O1群霍乱弧菌多价血清所凝集，称之为非O1群霍乱弧菌，以往也称不凝集弧菌或不凝集霍乱弧菌。 7．临床意义 霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的病原菌，该菌能产生霍乱肠毒素，作用于小肠黏膜，引起肠液大量分泌，表现为严重腹泻(米泔水样便)、呕吐、脱水和酸中毒，病死率很高。 8．鉴定流程 4．药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100一$20必威体育精装版版本文件。 5．质量控制 见《质量管理程序》。 6．检验结果解释与分析 初次分离时采用pH 8.6的碱性蛋白胨水增菌，6～8小时，液体呈均匀混浊，表面形成菌膜。 根据O1群菌其O抗原中的ABC因子，又可进一步将其分为小川(AB)、稻叶(AC)和彦岛(ABC) 等3个血清型；还可根据其产毒基因的有无和对人的侵袭力，划分为流行株和非流行株，流行株才 是霍乱真正的病原菌。部分菌株不被O1群霍乱弧菌多价血清所凝集，称之为非O1群霍乱弧菌， 以往也称不凝集弧菌或不凝集霍乱弧菌。 7．临床意义 霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的病原菌，该菌能产生霍乱肠毒素，作用于小肠黏膜，引起 肠液大量分泌，表现为严重腹泻(米泔水样便)、呕吐、脱水和酸中毒，病死率很高。 8．鉴定流程 参考文献 粪便 增菌培养（碱性胨水） TCBS或其他选择平板 玻片凝聚阳性，盐水对照不凝聚 初步报告 送CDC最后鉴定 快速诊断