微生物标准操作规程六1.docVIP

XXX人民医院检验科微生物室 标准操作文件 文件编号：WSW-SOP-007 版本号：2007 第1次修改 编写者：XXX XXX 审核者：XXX 修订日期：2012年1月15日 页码：第 1 页 共 2 页 脓及伤口标本细菌学检验标 准操作规程 1.目的 规范脓及伤口标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2．适用范围 脓液培养或涂片检查。 3.标本 3.1 标本类型 脓液。 3.2 标本采集。 3.2.1 开放性脓肿和脓性分泌物 用无菌盐水或75％酒精擦去表面渗出物，用拭子深入溃疡深处采集2支拭子，一支为涂片检查用，1支作培养用。 3.2.2 大面积烧伤的创面分泌物 用灭菌棉拭取多部位创面的脓液或分泌物，置灭菌试管内（注明采集部位）送检。 3.2.3 封闭性脓肿 消毒局部皮肤或粘膜表面后，用注射器抽取，将脓液注入多功能培养 瓶或无菌试管内送检。疑为厌氧菌感染时，应作床边接种或置厌氧运送培养基内送检。 3.3 标本拒收标准。 3.3.1 标本标识与化验申请单不符。 3.3.2 标本不是无菌留取。 3.3.3 送标本的时间在采集标本后超过2小时。 4.试剂、仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3％过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。 4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性细菌药敏卡（GNS）、革兰阳性细菌鉴定卡(GPI)、革兰阳性细菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。 4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。 5.细菌鉴定和药敏质控 参见《质量管理程序》。 6.检验步骤 接受标本后。立即对标本进行编号、登记。 6.1 涂片检查 革兰染色镜检，报告“查见革兰X性菌，形似XX菌”或报告“未查见细菌”。 6.2培养 6.2.1 一般细菌培养 标本接种血琼脂平板和麦康凯琼脂平板(或EMB、中国蓝琼脂平脓及伤口标本细菌学检验标准操作规程板)，35℃培养18～24小时后，根据菌落特性和形态染色，作出初步判断，再按各类细菌的生物学特性进行鉴定。 6.2.2厌氧菌培养 取脓液标本接种厌氧血琼脂平板及其他厌氧选择平板，置于厌氧环境培养，根据生长情况及涂片染色结果，按厌氧菌生物学特性进行鉴定。 6．2 3嗜血杆菌及奈瑟菌培养 接种于巧克力琼脂平板，置5％～10％CO2环境中培养。 6．2 4结核分枝杆菌培养 参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》 6 2．5真菌培养 可用沙氏培养基。 7．操作流程 脓液及创伤感染分泌物 涂片染色 需氧培养 厌氧培养 血琼脂平板、麦康凯 厌氧血琼脂平板 35℃培养18～24h 35℃厌氧培养平板， 观察菌落特征及涂片、 耐氧试验 染色 仪器或手工细菌鉴定及 厌氧血平板生长 药敏试验 发出报告 8．结果报告 查见致病菌，报告菌名和药敏结果。 9．注意事项 9.1 对于某些特殊病人(如气性坏疽病人)，在菌种鉴定及药敏试验结果尚未报出之前，根据涂片镜检情况，采取治疗措施。 9.2 厌氧菌培养取得样本后，拭子应立即置于厌氧运送管，尽可能少让样本暴露于空气中。穿刺时最好以针筒直接抽取，避免接触环境中氧气。 10．临床意义 从脓液及创伤标本中能检出的病原微生物种类很多，最常见的由葡萄球菌和链球菌引起的局部化脓性感染，包括有毛囊炎、疖、痈、甲沟炎、扁桃体炎、乳腺炎、中耳炎、外耳道疖肿、外耳道炎、细菌性结膜炎、脓疱疮、外科切口及创伤感染等。化脓性骨髓炎、化脓性关节炎的主要致病菌是金黄色葡萄球菌。慢性骨髓炎和慢性化脓性关节炎病原菌中，除上述细菌外，主要为结核分枝杆菌。脓液标本中可检出铜绿假单胞菌、变形杆菌和类白喉棒状杆菌等，常为继发性感染或污染所致。气性坏疽主要致病菌为产气荚膜梭菌，其次为水肿梭菌、败毒梭菌及溶组织梭菌等。坏疽常继发葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌或其它需氧菌感染。器官脓肿和机体深部组织的脓肿多为厌氧菌感染。 11.危急值报告 培养出产气荚膜梭菌及时按传染病报告。