细胞培养室的建立.docVIP

#1 ?【经验转帖】细胞培养室的建立 zz前段时间，经历了几个月的时间，为实验室建了一个细胞培养间。目前这个细胞培养间运转良好，培养的神经元长了10来天，长势不错，已经可以认为细胞培养室建立成功。在建立细胞培养间的过程中，碰到了许多问题，逐一解决后，觉得大家如果要建立细胞培养间，肯定也会碰到许多相同的问题，所以将我碰到的问题整理出来。首先向大家推荐一本书，个人认为是比较经典的——《动物细胞培养-基本技术指南》科学出版社，英，R.I.弗雷谢尼。内容不多，但以下的资料大部分是书上找不到的。?????2005-4-30 ???????????????????????????????????? 陆新江 一、建细胞间的一些细节问题：一、建细胞间的一些细节问题： 1、甲醛薰蒸：资料（internet）： 40％甲醛溶液(药用规格、福建三明化工总厂出品)，用量30 ml／m3，室内温度21～24，相对湿度75％～85％，加热薰蒸使蒸汽弥漫全室，关闭门窗1 h。甲醛水溶液为无色，具有强烈刺激性气味的液体，可杀灭多数微生物，价廉，熏蒸消毒时不损坏衣服、家具、皮革、橡胶等。市售的甲醛水溶液中一般含37－40%的甲醛。其主要用法为：1．熏蒸消毒:　对室内消毒其用量为20－25%毫升/米，在加热该溶液时最好同时煮沸一壶水，使室内相对温度保持在70-90%左右，室内温度最好在20摄氏度以上，作用时间12-24小时。如消毒皮毛服装，甲醛水溶液的用量可加至125毫升/米,挂衣密度为每平方米3套为宜。熏蒸消毒时应密闭门窗。消毒后一般多用自然通风驱散甲醛气体，其需时较长，急于排出气体，可将25%氨水加热蒸发中和。氨水用量为所用甲醛水溶液的一半，中和时间为30分钟。2．自然挥发: 将较大量的甲醛水溶液放入一敞开容器中，室内温度保持在18摄氏度以上，同时室内喷水以保持相对湿度在70%以上，经16小时可达到室内消毒的目的。关于甲酸、甲醛和甲醇三者的毒性比较：甲酸的毒性比甲醇大6倍，甲醛的毒性比甲醇大30倍。所以吃进4~10克甲醇，就能引起慢性中毒。它的毒性作用主要表现在损伤视力，使视力减退（不能矫正），视野缩小，以致双目失明，直到死亡。 实际操作：我的每个房间是7个平方，约20个立方。按书上的算要福尔马林300ml，高锰酸钾100g。高锰酸钾放入甲醛液体中后，在开始的3秒钟内没有反映，3秒钟以后，会产生大量烟气。所以一旦在甲醛中加了高锰酸钾请马上离开灭菌室，并关上门。高锰酸钾放入甲醛液体中会使液体沸腾，所以反应要在比较大的大口径容器进行，本人用的是脸盆。甲醛气体毒性非常强，所以操作时一定要带上防毒面具。 2、关于紫外线： 资料：紫外线的穿透能力非常弱的，主要靠电离产生氧自由基来消毒。细胞培养室里面一些不能照射紫外的物件可以用一般的材料盖住。如：玻璃和有机玻璃都可以的。紫外有些人认为大型精密的显微镜是不可以照紫外的，因为它们的镜头上涂的膜会被分解掉，但我特意问了我校光学系的老师，他们认为是没有关系的。紫外线在许多实验室被认为是起心理安慰作用的。我参观过的一个细胞培养间他们的房间大约6平方米，但是只装了30W的紫外灯，但前提是他们有一个层流系统。个人认为，如果细胞培养间有层流系统，那紫外的作用是可以被忽略的，但如果没有层流系统，那么紫外的作用还是相当重要。此外，不要担心紫外不能照射到的角落，因为紫外杀菌功能除了紫外本身以外，还可以由产生的臭氧来完成。臭氧过量吸入的作用应该和双氧水的作用是一样的，个人认为也许有一定的致癌性。所以紫外灭菌以后，最好过一个小时再进去。 3、关于新洁尔灭： 资料： 【药品名称】苯扎溴铵溶液 (新洁而灭溶液) (乙类非处方药【别 名】BenzalkoniumBromideSolution【标准来源】《中华人民共和国药典》2000年版。【性 状】 无色或淡黄色的澄明液体;芳香;味极苦;强力振摇能发生多量泡沫，遇低温可能发生浑浊或沉淀。【药物组成】每毫升含苯扎溴铵0.05克 (5%)。【作用类别】皮肤科用药品。【药理作用】苯扎溴铵为阳离子表面活性剂类广谱杀菌剂。【临床应用】用于皮肤黏膜和伤口的消毒。【用法用量】 外用，使用前应稀释即配即用。皮肤消毒使用0.1%溶液；创面黏膜消毒用0.01%溶液； 稀释方法：0.1%溶液：取本品一份，加纯化水或清水50份；0.01%溶液：取本品1份，加纯化水或清水500份。【注意事项】 l. 本品为外用消毒防腐药，不可内服。2. 不得用塑料或铝制容器贮存。3. 涂布部位如有灼烧感、瘙痒、红肿等，应停止用药，洗净。必要时向医师咨询。4. 低温时，可能出现混浊或沉淀，可置于温水中加温，振摇使溶解后使用。5. 儿童必须在成人监护下使用。【不良反应】偶见过敏反应。 【药物相互作用】