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引物查询方法 一共有两种查询引物的方法，包括primerbank和primer3，当我们查到引物时，我们需要用Pubmed来验证。详细说明见下文。 Primerbank 用引物银行查询引物时，我们只需要输入引物的名称，种属 网址：/primerbank/ 2.primer 3 使用这个工具之前您需要在Pubmed中查到您的目的基因的序列，然后黏贴到primer3中，软件便会自动设计引物。 Pumed的使用方法如下： 网址：/pubmed/ Primer3 网址：http://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/ 完成引物的设计后，我们可以用pubmedblast来验证引物 Blast 网址：/Blast.cgi 输入网址会显示以下页面，按照以下步骤便可验证 大概就是这样，不足之处还望大家给予建议和谅解 将search by 修改为keyword 将species修改为您所需要的种属，如mouse 输入您所需查的基因的名字，如atg5 点击submit 点击这里，您将看到引物在编码序列中的位置 您将得到所需查的基因的引物的结果 点击这里绿色的部分，您可以看到这个引物的Qpcr的结果 输入您的目的基因，如atg7 修改为nucleotide 最后单击search 点击这里选种属 点击fasta选项 筛选符合您需求的，我们是自噬相关的atg7，因此选这个 这就是您所要的序列，复制 打开primer3的网址 黏贴如在pubmed中查到的基因序列 修改为None 选中pick left和pick right 点击这个选项 修改为您所需产物的大小范围 这个是软件默认的最好的引物，下面还有其他引物 这就是结果的页面 下拉页面，您将看到软件对您的基因锁设计的全部引物 .输入网址后选择网页下面的这个地方，primer blast 修改种属 修改您所期望得到的扩增产物的大小，如qpcr 一般在200以内 输入查得的上下游引物的序列 最后点击页面最下的此选项 点击这个紫色的，这是引物的一个编号，您会看到详细的介绍 这个页面有引物的位置等信息 点击这里您会看到一些文献是使用过atg7的，但不一定是您所查的那一个