实时荧光定量PCR仪中荧光检测装置的设计.pdfVIP

2011年 第3O卷 第3期 传感器与微系统(TransducerandMicrosystemTechnologies) 111 实时荧光定量 PCR仪 中荧光检测装置的设计 程 琦 ，孔 明，周 洋 (中国计量学院 计量测试工程学院，浙江 杭州 310018) 摘 要：设计了基于LED光源的积分球式聚合酶链式反应 (PCR)荧光检测装置。系统采用单色LED作 为光源，经过积分球的均匀辐射后 ，减少光源对样 品的影响，再通过光 电倍增管与后续电路，得到PCR循 环中的实时荧光光强 ，这有效地减小了荧光检测装置的体积，提高了仪器的性价比。实验通过装置和 iCy— cler—iQ5实时荧光PCR仪的检测数据进行比对，仪器偏差分别为9．44％和 25．98％，发现装置具有更高的 精确度 ，更好的稳定性和重复性。 关键词：聚合酶链式反应 ；积分球；光电倍增管 ；荧光检测 中图分类号：TH744．16 文献标识码 ：A 文章编号：1000-9787(2011)03-0111-03 Design offluorescencedetection devicein real-time quantitativePCR instrument CHENGQi，KONGMing，ZHOUYang (CollegeofMetrology MeasurementEngineering，ChinaJiliangUniversity， Hangzhou310018，China) Abstract：PCR fluorescencedetectiondevice isdesigned based OnLED and integrating sphere．System used monochromaticLED asthelightSOUrCe，whichthrough theintegratingsphereofuni~rm radiationtoreducethe influenceoflightsourceonthesample．Throughthephotomuhipliertubeandfollow—upcircuit，thereal—timePCR cyclefluorescenceintensityisgotten．Thisdesign could effectivelyreducedthevolumeoffluorescencedetection deviceandimproved thecost—effectiveofinstrument．Thisexperimentalresultsiscompared with theresultsof iCycler—iQ5PCRinstrument．Theinstrumentaldeviationsare9．44％ and25．98％ respectively．Itshowsthatthis devicehashigherprecision，betterstabilityandreproducibility． Keywords：PCR；integratingsphere；photomultipliertube；fluorescencedetection 0 引 言 氙灯、汞灯 、钨灯和激光器 。氙灯、汞灯和钨灯虽然辐射 聚合酶链式反应 (polymerasechainreaction，PCR)是一 波段范围广，但在不同的波段输出信号强度不同。激光器 种在体外模拟 自然DNA复制过程的核酸扩增技术 ，其原理 是 目前高性能荧光仪器主要使用的光源，单色性好，没有杂 类似于天然DNA的复制 ，是体外酶促反应选择性地合成特 散光，但波长选择范围小