糖尿病早期大鼠坐骨神经形态学的实验研究.docVIP

　　糖尿病早期大鼠坐骨神经形态学的实验研究 【摘要】 研究 糖尿病早期大鼠周围神经形态学变化，为糖尿病周围神经病变动物模型的确立提供客观依据。 方法 ：采用链脲佐菌素（ＳＴＺ）诱导大鼠建立糖尿病模型（DM），光镜及电镜下观察大鼠６周末坐骨神经病理形态学变化，并对坐骨神经横切面进行定量 分析 。结果：ＤＭ大鼠６周时坐骨神经出现明显的病理损害。光镜下见坐骨神经有髓鞘神经纤维空泡样变性、轴索肿胀。电镜下见严重脱鞘改变。病理图像分析结果与电镜结果相符。结论：ＳＴＺ诱导大鼠早期已出现明显的周围神经损害，符合糖尿病周围神经病变（ＤＰＮ）的病理特点，说明ＤＰＮ模型建立成功。 【关键词】糖尿病；大鼠；周围神经病变 　　ＡｂｓｔｒａｃｔObjective：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｎｅｒｖｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒａｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｓｔａｇｅ，　ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｐｒｏｆｆｅｒ　ａｎ　ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｂｅｉｎｇ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｎｅｕｒｏｐｈａｔｈｙ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ｓｔｒｅｐｏｔｏｚｏｔｏｃｉｎ（ＳＴＺ）．Ａｆｔｅｒ　６　ｗｅｅｋｓ，　ｔｈｅ　ｈｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｙ　ｏｆ　ｓｕｒａｌ　ｎｅｒｖｅ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｓｅｄicroscopeandelectronmicroscpe．Ｒｅｓｕｌｔｓ：　Ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｆｉｂｅｒｓ　ｄｅｎｓｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｎｅｒｖｅ　ｏｆ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒａｔ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｆｅｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｎｏｒｍａｌ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ　＜０.０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｎｅｕｒｏｐｈａｔｈｙ　ｏｆ　ＳＴＺｉｎｄｕｃｅｄ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｒａｔｓ　ａｐｐｅａｒｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ｓｔａｇｅ，　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｈｉｓｔｏｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｙ　ｏｆ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｎｅｕｒｏｐｈａｔｈｙ．　Ｉｔ　ｃｅｒｔｉｆｉｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｎｅｕｒｏｐｈａｔｈｙ　ｉｓ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ． 　　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓｄｉａｂｅｔｅｓ　ｍｅｌｌｉｔｕｓ；rat;peripheralneurophathy 为了研究早期糖尿病（ＤＭ）大鼠坐骨神经形态学的改变，我们采用链脲佐菌素诱导大鼠建立糖尿病模型，观察ＤＭ大鼠６周末坐骨神经病理形态的变化，为糖尿病周围神经病变动物模型的确立提供 科学 依据。 　　１材料与方法 　　１.１材料 　　１.１.１主要仪器 　　（１）日本ＪＥＭ１００ＣＸⅡ型透射电镜；（２）德国罗氏公司Ａｃｃｕ　–　ＣＨＥＫ型电感血糖仪；（３）德国ＬＥＩＣＡ　ＲＭ２１３５型精密轮转切片机；（４）北航ＣＭＩＡＳＷＩＮ　ＳＹＳＴＥＭ多功能真彩色病理图像分析系统。 　　１.１.２主要药品 　　链脲佐菌素（ＳＴＺ）购于北京邦定泰克生物制药有限公司（美国Ｓｉｇｍａ公司）。 　　１.２方法 　　１.２.１动物模型的建立及分组 　　健康清洁级（ＳＰＦ级）ＳＤ雄性大鼠２０只，体重为（２２０±２０）ｇ，购于北京维通利华实验动物有限责任公司。适应性喂养１周后，按体重层次随机取１０只为正常对照组，１０只为造模组。用０.１　ｍｍｏｌ/Ｌ无菌枸橼酸缓冲液（ｐＨ=４.２，４　℃），将ＳＴＺ配成２％的溶液，大鼠禁食１０　ｈ后，按５３　ｍｇ/ｋｇ腹腔注射，７２　ｈ后测定血糖大于１６.６５　ｍｍｏｌ/Ｌ者列入观察对象；正常对照组正常喂养。 　　１.２.２标本采集 　　实验至第６周结束，腹腔注射20%乌拉坦麻醉大鼠（０.４　ｍｌ/１００　ｇ），分离双侧坐骨神经，一侧神经用１０％甲醛固定待作光镜；另一侧坐骨神经置２.５％戊二醛中待作电镜。 　　１.２.３光镜及电镜标本的制作 　　光镜标本：取１０％甲醛固定的坐骨神经用水洗，１％锇酸染色，常规脱水、石蜡包埋，德国ＬＥＩＣＡ　ＲＭ２１３５型精密轮转切片机连续切片，厚５　μｍ，在４０×１０倍视野下观察其横切面及纵切面病理变化。电镜标本：取１　ｍｍ２大小２.５％戊二醛（０.０５　ｍｍｏｌ/Ｌ）固定的坐骨神经组织，用１％锇酸固定，Ｅｐｏｎ８１２包埋，超薄切片，乙酸双氧铀和枸橼酸铅双染色，乙醇丙酮梯度脱水，ＪＥＭ１００ＣＸⅡ型透射电镜观察有髓鞘神经纤维脱