高效液相色谱法测定发酵液中色氨酸和酪氨酸含量的研究.pdfVIP

… 第40卷，第 1期 安 徽 化 工 Vo1．40，No．1 o 2014年 2月 ANHUICHEMICALINDUSTRY Feb．2014 · 分析测试 · 高效液相色谱法测定发酵液中色氨酸和酪氨酸含量的研究 纪传侠 (安徽丰原集团发酵技术工程研究有限公司，安徽 蚌埠 233010) 摘要：建立了高效液相色谱法测定发酵液中色氨酸和酪氨酸含量的方法。采用 AgilentC18柱(250mm×4．6ram，5 m)，以0．1inol／[醋酸 钠(pH4．0±0．05)一甲醇(90：10)为流动相，流速为 1．0mL·rain，紫外检测器的检测波长为280nm，柱温30℃，结果显示，色氨酸的线性范 同为50～500 gm·I～，相关系数为r=0．9985，平均回收率为99．3％(n=4)；酪氨酸的线性范围为20～2000 gm·L一，相关系数为r=0．9991， 平均刚收率为 1O0．2％(n=4)。该方法无需衍生，直接测定，简便，准确 ，用于发酵液中色氨酸和酪氨酸含量的测定，结果令人满意。 关键词：高效液相色谱 ；发酵液；色氨酸；酪氨酸 doi：10．3969~．issn．1008-553X．2014．01．024 中图分类号 ：0657．72 文献标识码 ：A 文章编号：1008—553X(2014)01—0068—03 酪氨酸(Tyr)是人体的非必需氨基酸，色氨酸(Trp) 2_2对照溶液的配制 是人体内必不可少的氨基酸之一，参与人体蛋白质的合 精密称取酪氨酸对照品0．0200g和色氨酸对照品 成和代谢，在人体神经系统中发挥着重要的作用。色氨 0．2000g，用去离子水溶解，定容至 100mL，制成氨基酸标 酸在医药、食品和饲料添加剂方面有着广泛的用途。由 样的储备液，此溶液现用现配。 于它在从天然蛋 白质中提取来源有限，而化学合成代价 2．3样品的处理 较高，因此一般采用发酵法来生产色氨酸。发酵液中色 取 lmL发酵液于 100mL容量瓶中，用去离子水溶 氨酸和酪氨酸的测定是发酵法生产色氨酸不可缺少的 解定容至刻度 ，摇匀后置于 10mL刻度离心管中，在 步骤，其定性和定量测定方法有纸层析法、薄层分析、比 3000～4000dmin的速度下离心 5min，取上清液通过 色法lJ_引，但是高效液相色谱法更能准确检测酪氨酸和色 0．22 1TI滤膜至进样瓶，高效液相测定。发酵液色谱图 氨酸的含量。国家标准方法中氨基酸的测定是经氨基酸 见图 l。 分析柱后衍生检测的方法 l，此方法避免了采用昂贵的 氨基酸衍生试剂 ，待测液直接进样，可以快速准确检测 发酵液中酪氨酸和色氨酸的含量，对发酵过程控制很有 意义。 1仪器与试剂 Agilent高效液相色谱仪：1200液相色谱分离系统； 自动进样器；紫外检测器。 L一色氨酸对照品(SIGMA公司)；L一酪氨酸对照品 (SIGMA公司)；甲醇(安徽时联特种溶剂有限公司，色谱 1一酪氨酸 ：2一色氨酸 纯)；醋酸钠 (宜兴第二化学试剂厂，分析纯)；冰乙酸(宜 图1发酵液的色谱图 兴第二化学试剂厂，分析纯)；水为去离子水。 2方法与结果 2．4系统适应性试验 精密称取 L—Tvr和L—Trp对照品约 1Omg，用去离 2．1色谱条件 子水配制成约 l)【)【g·mL 的溶液，在上述色谱条件 色谱柱 ：AgilentC18(250mmX4．6ram，5 113)；流动 下，进样 10 L，记录色谱图。L-Tyr和L—Trp峰之间均