张新祥《生化分析》第5.2章 荧光免疫分析-方思敏20140415.pdfVIP

荧光免疫分析法 报告人:方思敏 日期 1 提要 1 荧光免疫分析法原理 2 荧光免疫分析法分类 均相荧光免疫 非均相荧光免疫 3 总结 2 荧光免疫分析原理 原因 高的灵敏度：单分子检测 丰富的分析系统：分子过程 原理 将抗原抗体反应与荧光物质发光分析相结合，用荧光 检测仪检测抗原抗体复合物中特异性荧光强度，对标本中 微量或超微量物质进行定量测定。 3 荧光标记物 • 荧光素类  高的摩尔吸光系数和荧光量子产率 • 罗丹明类  与荧光素相同的基本结构，但荧光量子产率相对较低 • 香豆素类  广泛用于底物标记荧光免疫分析及酶联荧光免疫分析 • 藻胆蛋白类  水溶性很好，有很高的吸光能力 4 常用的荧光标记物 荧光物质 最大吸收光 最大发射光谱 应用 谱 异硫氰酸荧光素 490～495nm 520～530nm （黄 FAT、荧光偏振免疫 (FITC) 绿色） 测定 四乙基罗丹明 570～575nm 595～600nm （橙红FITC的衬比染色或 (RB200) 色） 双标记FAT 四甲基异硫氰酸罗550nm 620nm （橙红色） FITC的衬比染色或 丹明 (TRITC) 双标记FAT 藻红蛋白（PE） 490-560nm 595nm （红色） 双标记FAT、流式细 胞术 7-氨基-4-甲基香 354nm 430nm （蓝色） 双标记或多标记FAT 豆素 3+ Eu 螯合物 340nm 613nm 时间分辨荧光免疫 测定 5 荧光免疫分析的仪器 • 荧光仪的组成：光源、激发和发射滤光片或单色器、一个 光学系统（棱镜、反射镜或光导纤维）、检测系统 • 光源：汞蒸气、氙灯、卤素灯、激光 • 检测系统的选择要根据分析的要求：发射光来自于溶液还 是固体、固相的类型等。 6 荧光免疫分析的分类 • 均相荧光免疫分析 • 非均相荧光免疫分析  荧光偏振免疫分析（FPIA)  时间分辨荧光免疫分析  荧光