重叠延伸 PCR 法克隆蓖麻蚕β-FFase 同源基因.pdfVIP

· ?·? 蚕桑 ?????通讯? 总第 ???期? 重 叠延伸 ???法 克 隆蓖 麻蚕 ??一?????同源 基 因? 张蕾 李静 戴伟宏? 孟艳? ?安徽农业大学生命科 学学院 ???????? 摘要 ：本研究利用重 叠延伸 ???的方法 成功获得蓖麻 蚕两个 ?一?????基 因 ??????和 ??????全 长? ???，为今后研究 ??????和 ??????的体外表达以及分析酶活特征奠定了必要的实验基础。? 关键词：蓖麻蚕 ；家蚕 ；??一呋喃果糖苷酶；重叠延伸 ???? 蓖麻蚕????／???????????????????一种与家蚕亲? 到 的产物?】。如 今 ??????? 已经 成 为 分 子 生 物 学? 缘关 系较近的野蚕 ，食性广，但不吃桑叶。桑叶乳汁? 研究 中的常用方法 ，应用非 常广泛 ，如扩增 长片段? 中含有 大量 ???、?— ???等 生 物 碱 ，对 ?．?．??????? ???，基因定点诱变 ，构建融合基因等? 。? 等 非食 桑的 昆虫具 有 强 烈 的毒 性 ，阻 碍 其 生 长 以致? 笔 者利用 ???????的方 法 ，对 ?．?．??????的 ?? 死亡???】。生物碱主要抑制昆虫肠道 的蔗糖水解酶? 一 ?????基 因 ??????和 ??????的 ?末 端 、?末 端 以? 的活性 ，从而达到阻碍昆虫正常生长发育 的毒性效? 及 中间片段分别进行了扩增和拼接 ，以期获得 ?．?．? 果?，引。? ???????一?????同源基 因的完整 开放阅读框 ?????? ?一呋 喃果 糖 苷 酶 ??— ?????????????????，?—? ?????????????，????，为 将 来 进 行 基 因 的 体 外 表 达? ??????是一 种蔗 糖水 解 酶 ，在 植 物 和 微 生 物 中广泛? 及 其功 能研究 提供 基础 。? 存 在 ，家 蚕 ??????是 第 一个 被 分 子 克 隆 和功 能 鉴? ? 材 料 与方 法? 定的动物 ?— ????????。家蚕 ??????在家蚕幼虫 中? 肠 的杯状细胞 大 量 表达 ，其 编码 的 酶蛋 白具 有 典 型? ?．? 材 料? 的蔗 糖 水 解 酶 功 能 ，且 几 乎 不 受 ???的 抑 制 作? 连 接 有 ??????和 ??????????? 各 个 片 段 的? 用? 。??????的发 现 和 功 能 鉴 定 ，对 于 解 读 家 蚕? ????— ??????重组载体 为本 实验 室前期所构建 。? 为何能够巧妙地回避桑树生物碱毒害作用 的酶学适? 大肠杆 菌 ????感 受态 细胞 购 自北 京 全 式 金 公 司 。? 应机制具有重要 的科学意义