重组表达人IDO基因慢病毒载体的构建及鉴定.pdfVIP

蚌埠 医学院学报 ????年 ?月第 ??卷第?期? ???? ?文章编号 ?????—???????????????????? · 基 础 医 学 ·? 重组表 达人 ???基 因慢病毒载体 的构建及鉴定? 李 见?，王 露?，李玉云? ?摘要 ?目的：构建重组表达人 吲哚 胺 ?，??过 氧化 酶 ?????基 因的慢 病毒 载体 。方 法：设 计相 应 引物 ，从含 有人 ???基 因的? ????文库中 ，利用 聚合 酶链 反应 ?????方法钓取人 ???基 因的全 长编码 区片段。将 目的基因与经酶切线性化 的慢病毒载体? ???—??进行定 向的连接 ，将 产物转化细菌感受态细胞 。对长 出的克隆进行 菌落 ???鉴定 ，并对 阳性 的克 隆进行测 序及 比对? 分析。重组慢病毒及辅助包装质粒共转染 ????细胞 ，荧光显微镜下观察绿色荧光蛋 白?????的表达情况 ；采用 ???????????检? 测 ???．???融合蛋 白的表达情况 ；实时荧光定量 ???检测慢病毒浓缩 液的滴度 。结 果：成 功获取人 ???基 因编码 区序列 ，人? ???基 因慢病毒转染质粒 连接 正确 ；????细胞中产生慢病毒颗 粒 ；???基 因在细胞 内稳定 表达 ；人 ???基 因重组慢 病毒载体? 的滴度为 ????????／??。 结论 ：成功构建并包装 出高滴度的人 ???基 因重组慢病毒表达载体 ，为下一步转染 目的细胞奠定了? 实验基础 。? ?关键词 ?基 因表达 ；吲哚胺 ?，??过氧化酶 ；慢病毒载体 ；????细胞? ?中国图书资料分类法分类号 ??????．?；?????．?? ?文献标志码 ??? ??????????????????????????????????????????? ???????????????????????????????????????????????? ????????，? ???????，?????．???? ??．??????????????????????????????????，?．?????????????????????????????????????????????，? ??????????????????????，???????????????????，??????? ???????????????????：???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????．???????：???????????????? ??????????????????????????????????????