人和肽素(CCP)酶联免疫检测.docVIP

人和肽素（CCP）酶联免疫检测 试剂盒使用说明书 使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人和肽素（CCP），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。 用途： 用于人血清、血浆及相关液体样本中和肽素（CCP）的测定。 工作原理 本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人和肽素（CCP）的水平。向预先包被了人和肽素（CCP）单克隆抗体的酶标孔中加入和肽素（CCP），温育；洗涤后，加入HRP标记过的和肽素（CCP）抗体。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人和肽素（CCP）的浓度呈正相关。 试剂盒组成 1标准品（1920ng/L）0.5ml7显色剂A液6ml2标准品稀释液3ml8显色剂B液6ml3酶标包被板12孔×8条9终止液6ml4酶标试剂6ml10说明书1份530倍浓缩洗涤液20ml11封板膜2张6样品稀释液6ml12密封袋1个需要而未提供的试剂和器材 37℃恒温箱。 标准规格酶标仪。 精密移液器及一次性吸头 蒸馏水， 一次性试管 吸水纸 注意事项 从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差 建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 洗板方法 手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中 标本要求 1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 操作程序 标准品的稀释（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明在小试管中自行倍比稀释）： 960ng/L（5号标准品）120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液480ng/L（4号标准品）120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液240ng/L（3号标准品）120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液120ng/L（2号标准品）120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液60ng/L（1号标准品）120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。 弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。 每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。 弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。 每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟. 取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。 操作程序总结： 准备试剂，样品和标准品 加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟 洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟 洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色10分钟 加入终止液 15分钟之内读OD值 计算 检测范围：30ng/L→1500ng/L。 规格： 96T/盒 保存： 2-8℃ 有效期： 6个月（2-8℃）。