NT_proBNP特异性单克隆抗体的制备及鉴定.pdfVIP

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2017-04-21 发布于浙江
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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2016, 32 6 :148-154 NT-proBNP 特异性单克隆抗体的制备及鉴定刘鹏展1? 黄绮玲2? 何小维1? 李文美1，2? 张文琪1? 张赛2 （1. 华南理工大学食品科学与工程学院，广州 510640 ；2. 广州万孚生物技术股份有限公司，广州 510663）摘要：旨在制备并鉴定抗人 NT-proBNP 特异性单克隆抗体。采用重组 NT-proBNP 蛋白免疫 Balb/c 小鼠，取血清效价高的脾细胞与 SP2/0 细胞融合，经 HAT 筛选和有限稀释法亚克隆，获得阳性杂交瘤细胞株，用动物体内诱生法制备腹水，用正辛酸 - 硫酸铵沉淀法将抗体纯化，并测定抗体的亚类、效价、特异性及相对亲和力。结果表明，获得 4 株能稳定分泌抗人 NT-proBNP 单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株，分别命名为 1G12、1B2、3D5 和 2D11。抗体 Ig 亚类，1G12 和 1B2 为 IgG2a 型，2D11 为 IgG1 型， 3D5 为 IgG2b 型；1G12，1B2 和 3D5 的抗体效价达到 106，而 2D11 的效价仅达 104。特异性好，1G12、1B2、3D5 和 2D11 四株抗体的亲和常数依次为 9.32×1011、1.07×1012、2.31×1012 和 6.33×1010。成功制备了特异性抗人 NT-proBNP 单克隆抗体。关键词： NT-proBNP ；单克隆抗体；间接 ELISA 法 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016.06.021 Preparation and Identification of Monoclonal Antibody Specifically Against Human NT-proBNP LIU?Peng-zhan1? HUANG?Qi-ling2? HE?Xiao-wei1? LI?Wen-mei1，2? ZHANG?Wen-qi1? ZHANG?Sai2 （ . School of Food Science and Engineering，South China University of Technology，Guangzhou ； . Guangzhou Wondfo Biotech 1 510640 2 Corporation Ltd.，Guangzhou ） 510663 Abstract:? This?study?aims?to?prepare?and?identify?monoclonal?antibodies?specifically?against?human?NT-proBNP.?Balb/c?mice?was? immunized?with?labeled?recombinant?protein?NT-proB