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第五章 植物脱毒技术 Production of Virus-Free Plants ;一、一般概念;一、一般概念;如何获得一个不带病原菌的植株？ 病毒在植物体内分布是不均匀的，顶端分生组织一般说或者是无病毒的，或者是只携带有浓度很低的病毒。 Holmes（1948）通过茎尖扦插(shoot-tip cuttings)的办法，由受侵染的大丽花中获得了无病毒植株； Morel和Martin（1952）建立了消除病毒的茎尖培养方法(meristem-tip culture technique)。 ;二、脱毒方法 ;热处理脱毒缺点： （1）不是所有病毒对高温敏感 （2）热处理后成活率低 （3）过长的热处理使寄主植物抗性因子失活 ; 2. 茎尖培养脱毒 1960s 后期，茎尖培养脱毒开始成为最通用的方法。 优点： (i) the potential of removing fungal and bacterial infections from the donor plant; (ii) in vitro clonal propagation with high genetic fidelity; (iii) the practical propagule for cryopreservation and other techniques of germplasm storage; (iv) easily acceptable by quarantine regulations for international exchange; (v) the technique is suitable for precise in vitro multiplication of Chimeras嵌合体.;茎尖无病毒的理由： (i) Virus multiplication is dependent on the metabolism of the host plant. High metabolic activity in the actively dividing meristematic cells does not allow virus replication； (ii) The rapid spread of viruses in the plant is through the vascular system which is absent in the meristem. Those viruses invading non-vascular regions move from cell to cell via the plasmodesmatal(胞间连丝)connections, which is rather slow to keep pace with rapidly growing tip region; (iii) A high endogenous auxin level in the shoot tips may be inhibitory to the viruses; (iv) The meristem is probably protected by certain ‘virus inactivating systems’. ; 2. 茎尖培养脱毒 茎尖大小：一般以带1-2片叶原基为好，大小为0.2-0.3毫米为宜，超过0.5毫米时，脱毒效果差。（外植体过小茎尖存活率低） 培养基：能使茎尖快速生长、分化的培养基均适于脱毒。 前处理：切取茎尖之前，植物材料如经过预处理，如热水或热空气处理、低温处理、药物处理，均可大大提高脱毒效率。 培养条件：同一般茎尖培养 外植体生理状态：由活跃生长的芽上切取 ; 3. 愈伤组织培养脱毒 在由受感染的组织形成的愈伤组织中，并非所有的细胞都均匀一致地带有病原菌。 由受MTV侵染的烟草愈伤组织分离出来的单个细胞中，只有40%带有这种病毒。 通过植物个部位器官和组织的培养去分化诱导产生愈伤组织，然后从愈伤组织再分化产生芽，长成小植株，可以得到无病毒苗。 ; 4. 茎尖微体嫁接 对茎尖培养难于生根的植物，可进行试管茎尖微体嫁接。 方法： （1）砧木种子表面消毒，接于培养基发芽； （2）约2周的幼嫩实生苗无菌条件下切取顶部，留1-1.5cm上胚 轴部分，除去子叶一小段新梢，消毒后取出仅带1-3个叶 原基的茎尖约1mm大小作接穗； （4）倒T字形嫁接 （5）液体滤纸桥培养; 5. 茎尖微体嫁接 对茎尖培养难