第四章培養基的制作.pptVIP

第四章 培养基的制作;教学目的：熟练掌握各级培养基 的制作方法 。;第一节 　母种培养基的制作 一、菌种培养基 (一)按营养物质种类分类 l.天然培养基 常用的生物材料有马铃薯、胡萝卜、蚕蛹粉、豆芽汁、花生饼粉、玉米粉、酵母等。适合于各类微生物的生长 2.合成培养基 是指用已知成分和数量的化合物配制而成的培养基。适用研究 3.半合成培养基 利用天然物质作为碳、氮源及维生素的来源另加一些无机盐类配制而成;(二)按培养基的物理状态分类 1.液体培养基 不加琼脂，多用于生理生化方面研究,培养 液体菌种等。 2.固体培养基 　凝固剂的量,琼脂冬季为1.5%--2.0%,夏 季2.2%--2.3%。 3.半固体培养基 　含有较少量琼脂(0.2%--0.5%)的培养基, 使培养基未达到固态而呈粘稠状态。; 二、母种培养基配方： ;（一）营养液制作　1.　准备工作; ; 3.　熬煮 　　将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中，煮至酥而不烂。 ; 4.　过滤、加可溶药物 　 用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中加 入糖; 5.　熬琼脂、定容 　　 在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为止，定容至1000ml。; （二）营养液分装 　 1.　用注射器分装 　 2.　分装标准:分装量为试管长度的1/4—1/5。注意培养基不能沾污试管口。;3.塞棉塞 　　棉塞松紧适度，1/3在管外，2/3在管内。 4.扎捆 　　7-10支试管捆在一起，棉塞上包好防水纸，直立放入高压灭菌锅中。; (四)　摆斜面 　　灭菌结束后锅盖开1/5的小缝，用余热烘干报纸和 棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/2; （三）灭菌处理 在1.0—1.5 kg/cm2压力下维持20--30min。; (四)　摆斜面 　　灭菌结束后锅盖开1/5的小缝，用余热烘干报纸和 棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/2; 第二节 原种、栽培种培养基制作;③玉米芯、木屑混合培养基配方 玉米芯42%，木屑20%，豆秸20%，麸皮10%，过磷酸钙1.5%，石灰2%，石膏1%，糖0.5%，玉米面3%，料：水1=1：1.4-1.5。此配方适合于培养平菇原种。生长健壮，也可培养金针菇，滑子蘑原种。 ④软质木屑配方 椴木屑75%（木线厂下脚料，颗粒较大），麸皮15%，玉米面5%，石膏1.5%，石灰1%，糖0.5%，过磷酸钙1.5%，尿素0.5%，料，水=1：1.2左右。适用于金针菇，滑子蘑等分解基质能力较弱的品种使用。;⑤麦粒、木屑培养基配方 新鲜、优质小麦80%，阔叶树木屑20%，木屑：水=1：1左右，拌木屑用煮小麦水，或在此基础上，加入总量0.5%的过磷酸钙，0.5%的蔗糖,1%的石灰，在麦粒煮好后连同木屑拌入。 ⑥玉米粒培养基配方 优质新鲜玉米100%，或后期加入0.5%过磷酸钙，0.5%的糖,1%的石灰。 玉米粒培养基制作的原种，具备麦粒原种的优点，后劲更足，接种扩繁量更大。;二、原种培养基的制作方法 一、谷粒培养基制作 1.按配方称量各营养物质 配方一：优质新鲜小麦65%，木屑15%，棉籽壳15%，麸皮5%，石膏1%，过磷酸钙0.5%，糖0.5%，尿素0.5% 2.谷粒浸泡吸水 　　冬季浸泡24-48小时，夏季加1%石灰（以防变酸）浸泡24小时，隔夜换水。;3.　煮沸、沥干捞出 　　泡好后，漂洗干净（去杂），煮至饱胀 无白心，切忌煮开花，沥干水分后捞出。 4. 拌料 用煮小麦水拌木屑、棉籽壳、麸皮，最 后再一起与麦粒拌匀。 ;5.装瓶 (1)装料量应为1/3或1/2罐头瓶，便于培养 时摇动基料促进丝均匀生长。 (2)擦净并封瓶口 封口塑料袋采用规格为13cm×13cm×0.004cm 高压聚丙稀袋，二层，里层在中央剪一3cm宽 菱形口。至少二个皮套。;6.装锅灭菌 高压灭菌于126℃左右维持2小时；常 压灭菌于100℃维持10-12小时，夏季时间 可酌情延长。 7.出锅 、冷却 冷却至30℃以下待接种。 ;二、.木屑、玉米芯料培养基制作方法 1.按配方称料。 2.拌料：干混（将石膏和不溶于水的主料和 辅料混匀）；湿混（将石灰和溶于水的辅料 制成母液，加入所需水量稀释后拌料）。; ②装瓶：闷1-2个小时（夏季时间不宜过长） 待料充分吸足水后装瓶，装料至瓶肩，上紧下松 压平料面，擦净瓶口，打1.5cm粗接种孔至瓶底 封口。 ③灭菌：同谷料培养基制作 ? ④出锅、冷却：同谷粒培养基制作;三、栽培种