薄层荧光扫描法测定葡萄酒中的白藜芦醇及其糖苷异构体.pdfVIP

薄层荧光扫描法测定葡萄酒中的白藜芦醇及其糖苷异构体 陈 敏＊l 舒友琴2 何计国l 戴蕴青l l（中国农业大学食品学院，北京 l00083 ） 2（郑州牧业工程高等专科学校，郑州 450008） 摘 要 建立了薄层荧光扫描法同时测定葡萄酒中顺反白藜芦醇及其糖苷异构体的方法。样品用 C l8 固相 柱提取，以聚酰胺薄膜为固定相，苯 甲醇 甲酸（l0151l，V / V）为展开剂进行分离，荧光扫描法定量，4 种组分的 线性关系良好，相关系数为 0. 9972 ~ 0. 9996，平均回收率为 97. l% ~ 98. 5% ，RSD 为 2. 0% ~ 3. 2% 。对 6 种 市售葡萄酒进行了测定，结果满意。方法简便、快速、灵敏，测定成本低。 关键词 薄层荧光扫描法，白藜芦醇，白藜芦醇苷，葡萄酒 2004-02-l7 收稿；2004-08-3l 接受 本文系国家科技攻关计划资助项目（NO. 200lBA804A2l） ! 引 言 顺式和反式白藜芦醇（cis-and trans-resveratrOI）及顺式和反式白藜芦醇糖苷（ cis-and trans-piceid）是 4 种同时存在于葡萄酒，特别是红葡萄酒中的生物活性成分。白藜芦醇反式异构体的生物活性高于顺 式异构体。在紫外线照射下，反式异构体能够转化为顺式异构体［l］。近几年越来越多的药理实验表 明，白藜芦醇对人体具有多种功能，国内外对葡萄酒中白藜芦醇的保健作用及测定方法进行了大量的研 究［2 ~ 4］。葡萄酒中的白藜芦醇及其衍生物主要来源于葡萄果皮，不同葡萄酒中白藜芦醇及白藜芦醇苷 的绝对含量及顺反异构体之间的比例都有明显差异。 葡萄酒中白藜芦醇及其糖苷的测定有硅胶薄层-荧光扫描法［5］，HPLC 法［6］，GC / MS 法［7］，HPLC / MS 法［8］，毛细管电泳法［9］及二次微分简易示波伏安法［l0］等。但在通常条件下，多数方法只能测定顺、 反式白藜芦醇或反式白藜芦醇与其糖苷，而不能同时测定 4 种异构体。因而测定结果不能反映葡萄酒 中白藜芦醇各个异构体含量的高低。本实验首次采用固相萃取柱预处理样品，以聚酰胺薄膜层析分离， 紫外灯下观察定性，荧光扫描法定量，同时测定葡萄酒中的 4 种白藜芦醇异构体。方法简便、快速、灵 敏，测定成本低。 # 实验部分 #. ! 仪器和试剂 CS-930lPC 双波长飞点扫描分析仪（日本岛津公司）；聚酰胺薄膜（8 cm X 8 cm，浙江台州路桥四甲 生化塑料厂）；微量进样器（l0 ! L，上海安亭微量进样器厂）；ZF-C 型三用紫外分析仪（254 nm，365 nm，上海康禾光电仪器有限公司）；C l8 固相萃取柱（500 mg，6 mL，美国 Varian 公司）。白藜芦醇（ 反 式）对照品（纯度 99% ，德国 Sigma 公司）；白藜芦醇苷（反式）对照品（纯度 99% ，复旦大学药学院天 然药物研究室）；试剂苯、甲醇、甲酸、醋酸乙酯及无水乙醇等均为分析纯；葡萄酒样品（市售）。 #. # 实验条件 薄层色谱条件：以聚酰胺薄膜为固定相，以苯-甲醇-甲酸（l0151l），为展开剂，上行展开，展距 6 cm。 荧光扫描条件：荧光反射法线性扫描，线性参数 SX = 3，光源为汞灯， ex = 306 nm， ! em = 400 nm 滤光片， 狭缝 0. 4 mm X 5 mm， # Y = 0. 04 mm，峰检出方式：峰面积法。 #. $ 对照品溶液的制备 分别称取反式白藜芦醇和白藜芦醇苷对照品 2. 5 mg，用甲醇定容至 25 mL 作为储备液。取以上两 溶液适量，置 365 nm 紫外光下分别照射 2 h 和 l h 后，作为顺式白藜芦醇和顺式白藜芦醇苷对照品储备 液，待测溶液避光冷藏。高效液相色谱法测得其转化率分别为 69. 3% 和 58. 2% 。 第 33 卷 2005 年 5 月 分析化学（FENXI HUAXUE） 研究报告 Chinese JOurnaI Of AnaIyticaI Chemistry 第 5 期 635 ~ 638 2. 4 样品供试液的制备 葡萄酒中存在干扰色谱分离与测定的多种化合物，如黄酮、花色素和单宁等。实验通过选择淋洗液 的种类和用量，在保证回收率的前提下有效地消除了酚类物质的干扰。C 18 固相柱在使用前用乙酸乙 酯、乙醇活化。样品过柱后，依次用去离子水，pH 8. 0 的 12% 乙醇淋洗以除去大部分的酚类物质。洗脱 前需真空去除柱中水分以免影响洗脱剂对测定组分的溶解能力。文献报道的洗脱剂用量差别很大。本 研究发现，用与样品等体积的醋酸乙酯洗脱，由紫外分光光度法测得反式白藜芦醇和反式白藜芦醇苷的 萃取回收率