实验二、培养基的配制、消毒与灭菌幻灯片.pptVIP

实验二 培养基的制备 消毒与灭菌;培养基配制实验原理;培养基配制要素;培养基的分类;按照培养基的成分来分;按照培养基的物理状态;按照培养基的用途分;培养基灭菌;牛肉膏蛋白胨培养基的制备;马铃薯培养基（PDA）的制备;高氏Ⅰ号培养基的制备;无氮培养基的制备;豆芽汁培养基的制备;麦氏（Meclary）培养基的制备;LB培养基的制备;操作步骤;称量药品时，严防药品混杂。称完一种药品后需要将牛角匙洗净、擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。 药品不要弄错。如：K2HPO4和KH2PO4、水合形式和无水形式的化合物要注意分辨。;培养基中多种无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。 对于微量成分，可先配制成高浓度的储备液，按比例换算后再加入。 琼脂溶化过程中，要控制火力并不断搅拌，以免沸腾溢出或琼脂糊底烧焦。 不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基。;调pH值以前，先补足水分。 pH值不要调过头，以免回调影响个离子浓度。 ;固体分装：不超过试管高度的1/5；不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上以免污染棉塞而引起污染。 ;配好培养基后要贴上标签，写清培养基类型、组别、配制时间。 ;消毒与灭菌;消毒与灭菌方法;干热灭菌;细胞内蛋白质的凝固性与其含水量有关。在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白蛋凝固就越快，反之凝固缓慢。 因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160～170℃），时间要长（1～2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。;高压蒸气灭菌;在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。 其原因有三： 一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低； 二是湿热的穿透力比干热大； 三是湿热的蒸气有潜热存在。 1 g水在100℃时，由气态变为液态时可放出2.26 kJ(千焦)的热量。这种潜??，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。;在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。 当含盐类的液体和含盐的琼脂中大量的盐类泼洒在工作腔体，要立即换水，冲洗腔体，仔细擦干锅盖垫圈上的水滴。否则它们会带来腐蚀和变质。 要检查压力表上的指数为“0 MPa”后才能打开锅盖。 外来物质（金属、液体）不能堵塞通风孔，否则会引起装置故障、起火、短路。;;过滤除菌;;紫外线灭菌;紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2m为宜。 为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯前，可在无菌室内(或接种箱内)喷洒3%～5%石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。 无菌室内的桌面、凳子可用2%～3%的来苏尔擦洗，然后再开紫外灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。;灭菌的试管培养基冷至50 ℃ 左右再搁置，以防斜面上冷凝水太多。 斜面长度不超过试管总长的一半。;将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24－48小时，以检查灭菌是否彻底。;实验任务 ;作业