紫杉醇的提取工艺研究.docVIP

紫杉醇提取纯化方法的研究进展 紫杉醇是最早从红豆杉属植物中分离出来的三环二菇类化合物，是继阿霉素和顺铂之后最热点的抗癌新药。紫杉醇具有复杂的化学结构，分子由3个主环构成二菇核，分子中有11个手性中心和多个取代基团，母环部分是一个复杂的四环体系，有许多功能基团和立体化学特征。分子式C47H51NO14，分子量853.92。同位素示踪表明, 紫杉醇只结合到聚合的微管上, 不与未聚合的微管蛋白二聚体反应。细胞接触紫杉醇后会在细胞内积累大量的微管，这些微管的积累干扰了细胞的各种功能,特别是使细胞分裂停止于有丝分裂期，阻断了细胞的正常分裂。 通过Ⅱ-Ⅲ临床研究，紫杉醇主要适用于卵巢癌和乳腺癌，对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤也都有一定疗效。—acetyl-baCCatinlll，再用反相高效液相色谱分离其他紫杉烷类物质，从而避免了在分离纯化阶段多次使用色谱柱，。虽然目前反相色谱分离纯化紫杉醇的工艺尚没有工业化的报道，但相对于正相色谱工艺，反相色谱有很多优点。首先，它不消耗大量的有机溶剂，对环境污染较小;其次，人们在开发反相填料时专门引入的一些特定的键合相使反相填料有更好的选择性，在克服正相硅胶的不可逆吸附造成目标产物回收率低方面也很有价值。 3.3薄层色谱法 薄层色谱(TLC)是分离紫杉醇的常用方法。一般先把提取液浓缩，然后在TLC硅胶板上平行点样，用丙酮、氯仿、甲醇、庚烷、乙醚、二氯甲烷、乙酸乙醋等展开，再进行紫杉醇的定位。定位的方法有:与标准样进行对照，在254nm紫外灯下进行定位标记，刮下每一部位，装入小柱。用甲醇洗脱，将洗脱液蒸干，从而使紫杉醇得到分离。薄层色谱技术早期多用于紫杉烷类化合物的定性及半定量分析。TLC结合核磁共振(NMR)、质谱(MS)技术，己成功地分离获得多种新的紫杉烷类化合物，显示出在定性分析方面的优势。 Matysik等报道了一种分步梯度TLC结合光密度扫描定量测定紫杉醇的方法，该方法采用混合溶剂两步梯度展开，亦获得满意结果;由Stasko等人开发的多维薄层色谱法(MTLC)使TLC法获得了极大的发展。该项研究采用了三种薄层板:氰基板，二苯基板和氨基板，分别进行正相和两维洗脱。结果发现氰基板和二苯基板能有效分离紫杉醇和Cephalomafinine，而氨基板效果较差。虽然此项研究却是提供了从 TaxuSbrevifolia原料浸膏中精确分离紫杉烷类物质的方法，但还是无法对紫杉醇和其他紫杉烷类物质进行定量化。 3.4高效逆流色谱法 高效逆流色谱技术是当前国际上较新型的一种液液分配技术。该法具有分离效果好，溶剂用量少的优点，同时也具有无固体载体逆流色谱的内在优点。目前用于紫杉醇的分离有用正己烷一乙酸乙酷一乙醇一水(6:3:2:5，v/v/v/v)和正己烷-乙酸乙酷-甲醇-水(1:1:1:l)从红豆杉粗提物中分离纯化了紫杉醇、cepha1omannine、巴卡亭ш;采用石油醚(40℃~65℃)一乙酸乙酷一甲醇一水(50:70:80:65)为两相体系从混合物中分离得到纯的紫杉醇和cepha1omannine。Chiou等使用循环的高速逆流色谱分离紫杉醇和Cephalomannine的混合物，循环两次后两种物质谱峰的分离度由0.7上升到1.27。HSCCC有望成为紫杉醇的大规模生产技术。 3.5电泳色谱法 电泳色谱是一种新型色谱分离方法，这种方法和高效液相色谱比较，更迅速更经济，而且使用的溶剂量很小。近年来该法在紫杉醇的分离纯化方面得到应用。Chan等人利用电泳色谱分离紫杉醇和它的6种类似物中发现，使用此种方法能在15分钟内将这7中紫杉烷类物质成功地分开。Shao等用毛细管凝胶电泳色谱分离紫杉醇和14种相关的紫杉烷类化合物，用含有表面活性剂(十四烷基磺酸钠)的乙睛水溶液做缓冲剂，取得了很好的分离效果。乙睛在其中的作用还不明确，但是如果没有这种有机调节剂就不能实现这15种物质的分离。尽管使用电泳色谱分离紫杉烷类物质具有很多优点，但是由于其处理量微小，操作复杂，从而影响其大规模的应用。 随着紫杉醇市场的不断扩大，工业化规模的分离纯化工艺日益受到重视，分离工艺的经济性显得十分重要，所以研究人员又开发了常压和中压的正相和反相的制备色谱技术进一步完善了紫杉醇的分离工艺。Rao发明了一种制备型反相色谱技术，将这种技术和重结晶技术相结合，能简化紫杉醇的分离纯化工艺过程，使得只用一次色谱分离就能得到良好的分离效果。Nair等研究者采用正相制备色谱分离细胞发酵液，最终可以获得纯度很高的紫杉醇。Wu等又分别对正相和反相制备色谱的填装物质进行了研究，开发了一种新型高选择性的柱装填物系一 SwTaxane，使分离效率大大提高。