植物组织培养技术刘弘6-4课件教学.pptVIP

PPT研究院 POWERPOINT ACADEMY 2.试管苗嫁接 3.仪器与用具1.大蒜鳞茎破除休眠与热处理2.外植体取材和消毒3.茎尖剥离与培养4.继代增殖扩繁5.病毒检测 注意事项.eps 2.试管苗嫁接 表6-11　大蒜脱毒与快繁实训考核方案 6.5.1　人参愈伤组织、细胞培养与离体快繁 1.人参愈伤组织诱导及培养2.胚状体及芽和根的诱导3.人参花药培养4.人参细胞悬浮培养5.人参原生质体培养6.人参毛状根培养 1.人参愈伤组织诱导及培养 (1)外植体取材、消毒与接种　人参的根、茎、叶均可作为外植体诱导出愈伤组织，且嫩茎切段愈伤组织诱导频率比根切段更高。 小贴士.eps 1.人参愈伤组织诱导及培养 线.eps (2)愈伤组织诱导　用于诱导愈伤组织的培养基有多种，常用的为MS和White，大豆粉、棉子饼粉、玉米芽汁、大麦芽汁、椰乳、腐殖酸钠、牛肉提取物等天然补充物单独或相互配合使用，都能促进人参愈伤组织的生长。(3)继代增殖扩繁　愈伤组织继代培养初期，生长甚为缓慢，并且在前半年左右时间内，愈伤组织上经常见到有细小的再生根分化形成。 1.人参愈伤组织诱导及培养 图6-5　细胞生长周期 2.胚状体及芽和根的诱导 (1)胚状体的诱导　在MS培养基上，人参叶片、茎段和根的愈伤组织上均能诱导出胚状体，并且经过较长时间的继代，这种胚状体的分化能力仍然能继续保持。(2)芽和根的诱导　把正常的胚状体转移到含赤霉素的分化培养基上，在黑暗条件下形成芽和黄化苗，若给予光照则长成正常苗。 小贴士.eps 2.胚状体及芽和根的诱导 线.eps 3.人参花药培养 小贴士.eps 3.人参花药培养 线.eps (1)外植体取材、消毒与接种　不同发育时期的花药，即小孢子四分体期、单核早期、单核中期、单核晚期、双核期的花药，都可诱导出花粉愈伤组织，其中以单核中期的诱导频率最高，花粉愈伤组织的植株再生也是单核中期的诱导频率最高。(2)愈伤组织诱导　在MS、B5、N6和改良White等培养基上都具有较高的花粉愈伤组织的诱导频率。(3)器官分化　花药愈伤组织形成25～30d，达2mm左右时，将其转入分化培养基上进行分化培养。 4.人参细胞悬浮培养 (1)细胞系的选择　选择生长旺盛的愈伤组织接种于液体培养基中，进行悬浮振荡培养，待生长旺盛时，静置0.5h，取上清液(其中含有单个细胞)，均匀地植板于培养皿平板上，培养15d左右，选长势旺盛的细胞团，再进行液体振荡培养。(2)悬浮培养　人参细胞悬浮培养的方式有摇床培养和发酵罐培养。1)摇床培养。2)发酵罐培养。 图6-6　发酵罐培养示意图 4.人参细胞悬浮培养 小贴士.eps 4.人参细胞悬浮培养 线.eps 4.人参细胞悬浮培养 小贴士.eps 4.人参细胞悬浮培养 线.eps 4.人参细胞悬浮培养 小贴士.eps 4.人参细胞悬浮培养 线.eps 5.人参原生质体培养 (1)原生质体提取　将人参幼叶的悬浮培养细胞用混合酶液处理，酶液组成为2％纤维素酶、0.7％果胶酶，用CaCl26×10-3mol/L、KH2PO40.7×10-3mol/L盐溶液配制，渗透压稳定剂为11％的甘露醇，pH 5.8，酶液用0.45μm的微孔滤膜抽滤灭菌。 小贴士.eps 5.人参原生质体培养 线.eps (2)原生质体培养　将提取的原生质体培养在含2,4-D1.0mg/L＋NAA0.1mg/L＋KT 0.5mg/L＋LH500mg/L的MS液体培养基中。 6.人参毛状根培养 (1)外植体的转化　用于转化的材料可采用培养的人参根愈伤组织或新鲜人参根直接转化。1)人参根愈伤组织毛状根培养系统的建立。2)人参根直接转化。(2)Ri质粒转化根的产生与鉴定　Ri质粒T-DNA带有合成生长激素的基因和冠瘿碱合成酶基因，转化的植物细胞可以产生冠瘿碱并能在不含植物生长激素的培养基上生长，可以根据冠瘿碱的有无和激素自主生长特性筛选转化根。 6.5.2　银杏愈伤组织及细胞培养 1.外植体取材、消毒与接种2.愈伤组织诱导与继代增殖扩繁 1.外植体取材、消毒与接种  2.愈伤组织诱导与继代增殖扩繁  馋死 2.病毒检测 线.eps (3)血清学检测法　将待检测的茎尖苗叶片制样，用几种病毒的抗血清做琼脂双扩散(SDS)酶联免疫吸附法(ELISA)或斑点结合酶联免疫法(Dot-ELISA)检测，呈阳性反应的为带毒苗。 2.病毒检测 小贴士.eps 2.病毒检测 线.eps (4)电子显微镜检测法　一般可用免疫电镜检测，将覆Formvar膜的铜网放于抗血清液滴上孵育30min(37℃)，用铜网TBS，重蒸馏水冲洗，吸干，负染3min后置于电镜下观察；也可用普通电镜检测，将覆膜的铜网扣于检测样品液滴上孵育5min，用PB