植物组织培养技术王洪习第四章：植物离体培养体系课件教学.pptVIP

第四章：植物离体培养体系的建立 主讲教师： 王洪习 联系方式：123antai@ 植物离体培养体系建立的五大技术模块 植物离体培养的营养条件----培养基的配制 外植体的选择 外植体的灭菌与接种 外植体的培养技术 炼苗移栽技术 第一节：植物离体培养的营养条件 —培养基 主要内容 培养基的营养组成 常用培养基的类型与筛选 培养基母液的配制 培养基的配制、消毒与保存 学习要求 了解培养基的类型及组成 掌握培养基及其母液的配制方法 掌握培养基配方的筛选方法 一、培养基的概念及组成 培养基的概念 培养基是植物组织培养的重要基质，它提供植物生长所需的所有营养物质。 培养基的成分 无机营养 有机营养 琼脂 糖 激素 无机营养 大量元素 微量元素 大量元素 浓度大于0.5mmol/L 包括Ｎ、Ｐ 、Ｋ、Ｃa、Ｍg、Ｓ等元素 培养基中的供给状态： Ｎ：一般以硝态氮为主，配合一定量的氨态氮 Ｐ：以ＰＯ43-形式供给 Ｋ：以K+形式供给 Ca、Mg：以Ca2+ 、 Mg2+形式供给 S： 以SO42-形式供给 MS 大量元素 KNO3 NH4NO3 KH2PO4 MgSO4 · 7H2O CaCl2﹒2H2O 微量元素 浓度小于0.5mmol/L 包括Fe 、 Cu 、 Mo 、Zn、 Na 、Mn 、Co 、B、I等元素 培养基中的供给状态： Fe：以螯合铁形式提供（即FeSO4·7H2O和Na2-EDTA 的螯合物） 其它元素：均以无机盐形式提供 MS 微量元素 KI H3BO3 MnSO4 · 4H2O ZnSO4 · 7H2O NaMoO4 · 2H2O CuSO4 · 5H2O CoCl2 · 6H2O MS 铁盐 FeSO4 · 7H2O Na2 · EDTA 有机营养 维生素 氨基酸 有机添加物 维生素 VC：防止组织褐化 VB1：与愈伤组织的产生和生活力有关 VB6：促进根的生长 烟酸：促进胚的发育 肌醇：利于胚和芽的形成 氨基酸 甘氨酸 丝氨酸 酪氨酸 谷氨酰胺 天冬酰胺 水解酪蛋白(CH) 水解乳蛋白(LH) 有机添加物 椰乳 香蕉 马铃薯 酵母提取液 麦芽提取液 苹果汁 番茄汁 柑桔汁 MS 有机物 C6H12O6 · 2H2O NH2 · CH2· COOH C12H17ClN4OS ·HCl C8H11O3N · HCl NC5H4COOH 激素类—培养基的关键性物质 激素影响到植物的细胞分化、分裂、发育 激素影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠以及萌发等的生理生化活动 所以植物生长调节物是培养基的关键物质，对植物组织培养起着决定性作用 生长素 诱导愈伤组织形成 诱导根的分化 促进根、茎、芽的生长 种类：NAA(萘乙酸)；IAA(吲哚乙酸)；IBA(吲哚丁酸)；2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)。 活性强弱与活性比：2，4-DNAAIBAIAA；活性比：IAA∶ NAA∶2，4-D = 1∶10∶100。 作用：诱导愈伤组织和根分化，与CKT促进细胞分裂和伸长。 稳定性与溶解性：除IAA外，对热和光均稳定。多用95%酒精或稀NaOH溶液助溶。一般配成0.1-0.5mg/ml的母液。 浓度：0.05－5mg/L， NAA A：NAA 0mg/L，芽（少），根（无） B：NAA 0.1mg/L，芽（少），根（无），愈伤组织（少量） C：NAA 5.0mg/L，芽（少），根（多），愈伤组织（一定量） 细胞分裂素 诱导不定芽的分化 促进侧芽萌发生长 抑制根的分化 组培中常用的细胞分裂素 常见种类 6-BA(6-苄基氨基嘌呤) KT(激动素) ZT(玉米素) Zip(z-异戊烯腺嘌呤) 活性强弱：2-ip ZT 6-BA KT 作用：抑制顶端优势，促进侧芽的生长。多用于诱导不定芽分化和茎、苗增殖。 稳定性与溶解性：CTK对光、稀酸和热均稳定；溶解于稀酸和稀碱中，配制时常用稀HCl助溶。通常配制成1mg/ml的母液。 浓度：0.05－10.0mg/L BA A：BA(0mg/L) ，芽（减少），根（增多）愈伤组织（一定量） B：BA(0.1mg/L)，芽（适量），根（适量）愈伤组织（一定量） 赤霉素（GAs） 种类：GA3 作用：促茎伸长，促胚发育成植株；打破休眠；一般在器官形成后加入 稳定性和溶解性：不耐热，在低温条件下保存；溶于酒精，配制时可用少量95%酒精助溶。 培养基凝聚物 琼脂 用量 6－10g/L 种类 琼脂粉 琼脂条 作用 固化作用 注意：琼脂使用有优缺点；新买应试凝固力。 其他物质 玻璃纤维　滤纸桥　海绵等 辅助性物质 抗生素类物质 种类：青霉素、链霉素、庆大霉素等 用量：5－20m