植物组织培养技术王洪习第二部分：组培基本理论与操作2课件教学.pptVIP

第二部分：组培基本理论与操作 主讲教师： 王洪习 联系方式：123antai@ 第三章：植物组织培养实验室构建与基本操作 本讲主要内容 组培实验室的的基本构成与基本设备 组培实验室的设计原则 玻璃及塑料器皿的洗涤 实验用具及实验环境的灭菌 无菌操作人员的要求与消毒 学习要求 知识目标： 了解组培实验室的基本组成 掌握组培实验室的设计原则、总体要求和 设计方法 掌握组培常用仪器设备的使用方法 技能目标： 能够根据需要和实际情况科学设计实验室 熟练使用组织培养的仪器设备 第一节：组培实验室构建 组培实验室的基本构成 组培实验室的基本设备 组培实验室的设计原则 组培实验室的设计案例 一、组培实验室的基本构成 1、洗涤室 功能：组培用具洗涤、干燥和贮存；材料预处理与清洗；组培苗出瓶、清洗与整理等。 设计要求：10m2左右。房间宽敞明亮，方便工作；有电源、自来水和水槽（池），上下水畅通；地面耐湿、防滑、排水良好，便于清洁。 仪器与用具配置 2、培养基配制室 功能：培养基的配制、植物材料的预处理 设计要求：一般10～20m2左右。要求房间宽敞明亮、通风、干燥，便于多人操作；有电源、自来水和水槽（池），保证上下水道畅通。 仪器与用具配置 3.灭菌室 功能：培养基、接种工具等灭菌。设计要求：一般为5-10m2。安全、通风、明亮；墙壁和地面防潮、耐高温；配备水源、水槽（池）、电源或煤气加热装置和供排水设施；保证上下水道畅通，通风措施良好。 配备：高压灭菌器或微波炉、烘干箱等。 4、接种室与缓冲间 功能：植物材料的接种或培养物的转移等。 结构：缓冲间+接种室 设计要求:宜小不宜大，一般小接种室5－7m2 ，缓冲间2－3m2 。密闭、干爽、清洁明亮，地面平坦无缝、顶棚及墙壁密闭光滑，吊装紫外光灯，配置横拉门。 配备：超净台，工作台，搁架，医用小平车， 细菌过滤器、解剖镜、紫外灯、接种工具等。 5.培养室 功能：培养离体材料。 设计要求：①培养室的大小可根据生产规模和培养架规格、数量及其它附属设备而定。不宜过大，面积10－20m2 ，充分利用空间和节能，有缓冲间或走廊 。 ②能够控光控温。③保持密闭、干爽、整洁明亮，防止微生物感染。要求天花板、墙壁光滑平整、绝热防火，最好用塑钢板或瓷砖装修；地面用水磨石或瓷砖铺设，平坦无缝，方便室内消毒，并有利于反光，提高室内亮度。 6.观察室 功能：观察与鉴定培养材料生长分化是否正常，是否脱毒和发生变异。 设计要求：室内通风、清洁、明亮、干燥、安静，设备先进，保证光学仪器不振动、不受潮、不污染、不受光直射。 配备：生物显微镜，切片机，酶联免疫检测仪，PCR扩增仪等。 7. 驯化棚室 功能：组培苗驯化移栽。 设计要求：据规模来定。能够控温调湿、控光通风。 配置：环控设施。弥雾装置、遮阳网、暖气或地热线、移栽床等设施；塑料钵、花盆、穴盘等移栽容器；草炭、沙子等移栽基质。 注：室内驯化与设施下驯化均可。 二、设计原则与总体要求 设计原则 防止污染。 按照工艺流程科学设计，经济、实用和高效。 结构和布局合理，工作方便，节能、安全 规划设计与工作目的、规模及当地条件等相适应。 总体要求 实验室选址避开污染源，水电供应充足，交通便利。 保证实验室环境清洁。可设计过道、设备防尘、外来空气的过滤装置 .实验室必须满足实验准备、无菌操作和控制培养三个基本的工作需要。 实验室建造满足组培的需要 地面、墙壁和顶棚等要采用最小的产生灰尘建筑材料； 墙壁和天花板、地面的交界处宜做成弧形，便于日常清洁； 管道要尽量暗装，安排好暗敷管道的走向，便于日后的维修，并能确保在维修时不造成污染； 洗手池、下水道的位置要适宜，不得对培养带来污染，下水道开口位置应对实验室的洁净度影响最小，并有避免污染的措施； 实验室各分室的大小、比例要合理。培养室与其他分室（除驯化室外）的面积之比为3：2。培养室的有效面积占培养室总面积的2/3，与生产规模相适应。 明确实验室的采光、控温方式，应与气候条件相适应。一般采用人工光照和恒温控制。实验室可设计为密封式或半地下式。 电源并经专业部门设计、安装和验证合格之后，方可使用。应有备用电源。 设置防止昆虫、鸟类、鼠类等动物进入的设施。 接种室、培养室装修材料耐消毒、清洁和冲洗，并设置能确保与其洁净度相应的控温控湿的设施。 第二节：组培实验室的基本操作 玻璃及塑料器皿的洗涤与干燥 常见玻璃仪器的使用 实验用具及实验环境的灭菌 无菌操作人员的要求与消毒 一、玻璃及塑料器皿的洗涤与干燥 组培试验或生产过程中清洁与否，由于所用玻璃仪器及塑料器皿的不清洁常常会导致外植体材料被污染而致使试验失败。因此，实验用器皿洗涤清洁工作是十分重要的基本操作，是做好组培的前