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夏枯草总黄酮的抗氧化活性研究 　　摘要：采用分光光度法研究了夏枯草（Prunella vulgaris L.）总黄酮的抗氧化活-性。结果表明，在浓度为0.12mg/mL时，对羟基自由基（?OH）清除率达到96%；在浓度为0.004mg/mL时，对ABTS自由基正离子（ABTS+?）的清除率达到99%；在浓度为0.01mg/mL时，对超氧阴离子（02-?）的清除率达到92%：夏枯草总黄酮也具有较强的还原能力，证明夏枯草具有良好的还原能力和自由基清除活性。 　　关键词：夏枯草（Prunella vulgaris L.）；总黄酮；抗氧化；清除 　　中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）09-2316-03 　　夏枯草（Prunella vulgaris L.）为唇形科夏枯草属植物，该属植物全球约有15种，广泛分布于江苏、河南、湖北、湖南、陕西等地。夏枯草中富含苷类物质（三萜皂甙、芸香甙、金丝桃甙等）、糖类、黄酮类、挥发油、有机酸、香豆素、生物碱、咖啡酸等活性成分[，具有抗炎、降压及抗肿瘤等多种药理学活性。何力认为夏枯草对特异性免疫表现出非常强的抑制作用，其抗炎效果与肾上腺皮质中的糖皮质激素合成、分泌的增强密切相关。从夏枯草中提取出来的2α-羟基熊果酸、熊果酸、2α，3α-二羟基乌苏12烯-28酸、桦木酸具有明显的抗炎和抗过敏活性。夏枯草总三萜（TFP）可有效抑制RAW264.7细胞分泌的炎症因子，具有一定的抗炎作用。杨力等研究证明，夏枯草的乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌等均具有抑菌效果。夏枯草的丁醇、乙醇或氯仿提取物可以有效地舒张血管，降低血压的功效。夏枯草的75%乙醇提取物还可以升高NO含量，降低ET、AngⅡ含量，从而发挥其对SHIR大鼠的降压作用。研究表明，夏枯草总皂苷提取物可以使麻醉大鼠的舒张压及收缩压降低，临床上发现夏枯草汤剂治疗高血压的效果显著，比牛黄降压丸的效果更好。体外试验证明，夏枯草水煎醇沉粗提物对RaiiB淋巴瘤白血病细胞、JurkatT淋巴瘤白血病细胞生长均有明显的抑制效果。郑学芝等证明夏枯草提取物可抑制食管癌Eca-109细胞增殖，降低Bcl-2蛋白质表达，增加Bax蛋白质表达，从而诱导细胞凋亡。 　　黄酮类化合物广泛存在于植物体内，具有降低心肌耗氧量、清除体内自由基、增强机体免疫力、调血脂、降血压、防癌抗癌等药理学功能，是一类极具开发前景的天然抗氧化剂，夏枯草在中国分布广泛，资源丰富。目前，夏枯草的研究主要集中在化学成分的提取及其相关的生物学活性研究，而对其自由基清除活性的研究相对较少。本试验以夏枯草中总黄酮为研究对象，研究其自由基清除活性，并测定其还原能力，旨在为夏枯草进一步开发利用提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　夏枯草采于陕西省汉中市汉台区，将夏枯草烘干，粉碎后待用；芦丁（自制标准品）；无水乙醇、抗坏血酸、邻二氮菲、七水硫酸亚铁、双氧水、亚硝酸钠、ABTS、过硫酸钾、氢氧化钠、铁氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁、邻苯三酚，均为市售分析纯。 　　ZXL-RS-6A型数显恒温水浴锅（江苏省金坛市金祥龙电子有限公司）：SHZ-D（Ⅲ）型循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）：GZX-9070MBE型数显鼓风干燥箱（中国重庆银河试验仪器有限公司）：722E型分光光度计（上海光谱仪器有限公司）：FA2104N型电分析天平（上海思龙科学仪器有限公司）；TGL-16C型台式离心机（上海安宁科学仪器厂）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 夏枯草中总黄酮的提取 取新鲜夏枯草，于60℃烘干，粉碎。称取夏枯草粉末5.027g，设定温度为80℃，乙醇体积分数为65%，固液比为1：18（g/mL，下同）的条件下加热回流2h，抽滤，残渣再次浸取抽滤，合并两次滤液。乙醇提取液浓缩至25mL，转移至250mL容量瓶中，65%的乙醇定容，得到样品分析液。 　　1.2.2 绘制芦丁标准曲线 精确称取经干燥至恒重的芦丁标准品20.0mg，乙醇溶解至50mL定容，配成0.4mg/mL芦丁标准溶液。准确吸取标准溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00、9.00mL，分别加乙醇补至10.00mL，加入5%NaNO2溶液1.5mL，摇匀，静置6min；再加入10%Al（NO3）3溶液1.5mL。摇匀。静置6min。加入4%NaOH溶液15mL，用65%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15min，在波长510nm处测定其吸光度，以芦丁浓度（mg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程。 　　1.2.3 夏枯草总黄酮提取含量的测定 精确吸取样品溶液2.5mL，置于