实验四超微量全血尿素的测定(二乙酰一肟法)-陕西师范大学.ppt

运动生物化学实验课件 陕西师范大学运动与健康实验教学示范中心 实验五 血尿素氮的测定 (二乙酰一肟法) 复习巩固尿素的生成机理及生化评定意义。 学习血尿素氮的测定方法。 掌握血尿素氮指标在运动实践中的应用 一、 实验目的 去蛋白血滤液中的尿素，在强酸的条件下，与二乙酰一肟和硫氨脲共热反应，生成红色的二嗪衍生物，其颜色深浅与尿素含量成正比，通过与同样处理的尿素标准液比较，即可求出血尿素氮的含量。 加热 尿素 + 二乙酰一肟 红色复合物 强酸 （500nm波长有一吸收峰） 二、实验原理 1%的氟化钠溶液 10%的三氯乙酸溶液 二乙酰一肟-硫氨脲溶液：称取二乙酰一肟600g和硫氨脲30mg,加蒸馏水溶解，稀释至100ml,冰箱保存。 混合酸液：浓磷酸35ml,浓硫酸80ml,缓缓加入800ml蒸馏水中，冷却后加蒸馏水至1000ml。 尿素氮标准贮存液（1ml=1mg氮）：准确称取尿素0.2143g置于100ml容量瓶中，用1%硫酸溶解，稀释至刻度。 尿素氮标准应用液（1ml=1mg氮）：准确吸取尿素氮标准贮存液1ml，用1%硫酸稀释至100ml。 空白液：取1份0.1%氟化钠和3份10%的三氯乙酸混合而成。 三、实验试剂 制备去蛋白血液：吸取0.48 ml 1%的氟化钠溶液置于离心管中，采手指血20?l溶于其中，混匀后加入1.5 m10%的三氯乙酸，充分摇匀，离心5分钟（3000rpm），取上清液与另一小试管中备用。 取三只大试管，编号，按下表操作： 四、实验操作 测定管 标准管 空白管 空白液（mL） 0.5 — — 尿素氮标准应用液（mL） 0.5 — 去蛋白血滤液（mL） — 0.5 二乙酰一肟-硫氨脲溶液（mL） 0.5 0.5 0.5 混合酸液（mL） 3.0 3.0 3.0 充分混匀后，准确沸水浴中10分钟，置于流水中冷却至室温，以空白管调零，500nm波长比色 血尿素氮的测定 计算公式： 血尿素（mg%）= 2.143×血尿素氮（mg%） OD测 血尿素氮（mg%）= -------------- × 100 OD标 血尿素（mmol/L）=血尿素氮（mg%） × 0.375 五、实验结果 沸水浴时间对显色程度影响很大，应该严格控制。 二乙酰一肟-硫氨脲溶液不能久置，若有结晶析出应该重新配置。 运动实践中利用这一指标时，可以分别在运动前、后及次日晨取血。 六、注意事项 正常人血尿素安静值为3.2~7.0mmol/L。运动员的安静值与普通人一致。一般超过30分钟以上的运动会使血尿素含量有明显增加。 血尿素是评定运动量、机体疲劳程度及运动训练后机能恢复状况的良好指标。在评定运动量时，一般在运动前及运动后30-60min取血，若血尿素≥8mmol/L（血尿素疲劳阈值），且较运动前升高2mmol/L以上，说明运动量过大，机体不能适应，运动员已达疲劳状态。 在评定机能恢复状况时应分别在训练前、后及次日晨取血；评定一个训练周期情况时，应在周期始初、中间及结束时分别取晨血跟踪测试。 七、指标应用 运动生物化学实验课件 陕西师范大学运动与健康实验教学示范中心