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CD1a、CD209 及MHCII 在新生儿指皮组织中的研究 　　前言 　　目前，树突状细胞(dendritic cells，DCs)被认为是体内功能最强、唯一能激活初始T 细胞的专职抗原递呈细胞(antigenpresenting cells, APCs)，或启动获得性免疫反应、或诱导免疫耐受，是联系先天免疫与获得性免疫的枢纽。DCs 通过模式识别受体参与抗原物质的识别、内化、处理和加工等。皮肤作为人体最大的器官，是最重要的天然免疫屏障，也是联系体内外环境的枢纽。皮肤树突状细胞包括表皮朗格汉斯细胞(Langerhanscells，LCs)和真皮树突状细胞(Dermal dendritic cells，DDCs.)。LC 可特征性地表达CD1a 及独特细胞器-Birbeck 颗粒(BG);DDCs 进一步分为CD1ahigh/CD4+/CD14-/CD16-/CD2O6high/CD207/CD209+ 细胞和CD1a1ow/CD4+/CD14+/CD16-/CD206low/CD207-/CD209+ 细胞。在正常非炎症情况下，定居皮肤的LC 前体细胞主要存在于真皮，且在转化生长因子B(TGF B)和CCL20 共同作用下，LC 前体可通过真表皮屏障。DCs 是皮肤免疫系统的重要组成部分，或诱导免疫应答，或诱导免疫耐受。本研究采用CD1a、CD209 和MHCII 进行免疫组化染色，着重观察正常新生儿指皮组织DCs的形态、数量以及分布状况。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　5 例尸检新生儿双手无名指组织(小块指尖组织，生后1天死亡，死后24 小时送检)取自陕西省高新医院送检的尸检病例。所取组织发育良好，无炎症、坏死和肿瘤。OCT 冷冻包埋剂包埋指皮组织进行纵(垂直)切片观察。小鼠抗人CD209 单克隆抗体，购自Ramp;D 公司产品(产品号120509，工作浓度为1:200)，小鼠抗人CD1a 单克隆抗体购自DAKO 公司(产品号为F7141 ，工作浓度为1:100)，小鼠抗人MHC 单克隆抗体购自Antibody Diagnostica 公司(产品号为M--0305 ，工作浓度为1:100)，二抗试剂盒(产品号SP9002)和DAB 显色试剂盒(产品号SP9002)均购自北京中衫金桥公司。值得指出的是，本研究已通过西安交通大学医学伦理委员会的审核，所取新生儿手指(无名指指尖)样本均符合伦理原则。 　　1.2 制片及免疫组化染色 　　每例新生儿左手无名指组织做冰冻切片(厚度为3 微米)，行免疫组化染色，DAB 显色，苏木素复染;空白对照用PBS 代替单抗,其他染色步骤相同;每例新生儿右手无名指组织，常规石蜡切片，HE 染色,光镜观察。先在低倍镜下观察免疫组织化学染色阳性部位，再转到高倍镜下读取阳性细胞数量，每一标本取10 个高倍视野进行阳性细胞计数，比较阳性细胞的表达情况。 　　1.3 结果判定 　　以胞膜及胞浆为棕黄色颗粒的细胞作为阳性细胞，以棕黄色颗粒的轴突作为阳性轴突。每张切片随机取10 个高倍镜视野(times;400)，每个视野阳性细胞计数为每项相加后的总分值，每张切片的阳性细胞计数为10 个视野分值的平均数，计数染色阳性细胞和细胞总数，计算细胞阳性率：细胞阳性率= 阳性细胞数/细胞总数times;100%，结果以xplusmn;s 表示。 　　1.4 统计学分析 　　采用SPSS20.0 统计软件进行分析，结果以xplusmn;s 表示，多组间率的比较采用卡方检验，Plt;0.05 表示差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 病理学观察 　　光镜下，阳性细胞呈棕褐色，大小不等、形态多样，有数量不等的突起，呈散在或灶带状分布。CD1a 标记的阳性细胞胞膜有棕黄色物质沉着，细胞呈长梭形，有两个长短粗细不等突起，不同细胞间突起可相互连接，形态不规则，胞体较大，呈圆形或卵圆形，树突状突起依稀可见。该阳性细胞主要分布于表皮乳头周围，血管外膜以及真皮疏松结缔组织。CD209 标记的阳性细胞多为位于真皮层内，血管神经分叉处，血管外膜，环层小体被囊结缔组织中，细胞形态各异，圆形或长梭形。MHCII 标记的阳性细胞多位于真皮乳头周围、血管外膜处，细胞呈圆形或长梭形，伸出长短粗细不等的突起，阴性对照未见阳性细胞，石蜡HE 切片未见异常改变。 　　2.2 统计学结果 　　指皮组织中CD1a 标记的DCs 阳性率(23plusmn;11.9)%，CD209 标记的DCs 阳性率为(30plusmn;7.7)%，MHCII 标记的DCs 阳性率为(8plusmn;1.9)%，卡方检验显示三组阳性率