五分类血球仪的应用与进展2简析.ppt

血细胞分析仪的介绍 江苏省中医院 葛亮 血细胞分析仪50年的发展历史 1590 年荷兰人米德尔堡和詹森设计制造了最原始的显微镜（图1），1610 年伽利略使用望远镜观察小的物体并将其放大，后来被列文霍克改进成为原始的显微镜。1658 年意大利人马尔皮基应用最原始的显微镜首先观察到了红细胞，他是第一个见到红细胞的人，开始进行红细胞计数则是200 年后的事情了。而设计并生产出第一台血细胞计数仪则又过了近100 年。 库尔特原理 计数原理是根据血细胞的不良导电性和产生电阻抗原理来计数血液中的细胞，也就是电阻式血细胞计数原理，这种原理现在已经成为血细胞计数和分析中最为经典的原理。 现在，95%的血细胞分析仪采用库尔特原理 库尔特原理三要素：小孔、负压、电极检测：细胞大小和数量 红细胞通过小孔 白细胞通过小孔 血细胞分析仪的技术进步 1、稀释技术的进步 2、分析参数的增加 3、血小板计数功能的增加 4、自动取样技术 5、仪器的清洗技术 6、小孔管技术的改进 其他计数原理的血细胞分析仪 1. 激光法：应用单束激光照射到经过鞘流技术处理的排列成一列的单个细胞上，根据细胞阻断激光束的频率以及PMT 收集到的激光折射信号，对细胞的数量、体积进行分析的仪器。 其他计数原理的血细胞分析仪 2. 离心式血液分析仪：将血液充入到含义特殊试剂的毛细管内，在专用离心机上离心，根据血细胞中各种成份的比重不同而分布在不同的细胞层内的原理，血细胞被吖啶橙染色，各细胞层会有明显的颜色差异，然后将毛细管放在特殊的判读机上对不同的细胞层进行定量分析. 3. 移动光学法：早期的光学法血细胞计数仪器， 采用普通光源，血细胞在移动过程中被检测到，不能分析细胞的大小和内部结结构，因此仅可进行红细胞和白细胞的计数 库尔特技术 高频度分析-直方图 脉冲编辑（专利技术） 作用：删除不规则脉冲对体积测量的影响。 重叠校正（专利技术） 三次计数/延长计数 血小板计数以三次拟合的均值为依据； 对血小板浓度小于67X109/L的标本，仪器自动延长1-2个三次计数。 三次计数：统计补偿；监控计数过程的稳定性。 延长计数：针对低浓度的标本。 扫流技术(专利技术) 扫流技术(专利技术) 扫流技术(专利技术) 作用：防止红细胞回流对血小板计数的干扰； 防止细胞再度进入感应区被两次计数。 拟合曲线（专利技术） 拟合曲线 血小板计数的干扰主要来自: 2 fl以下：噪音;细菌的干扰 20 fl以上：裂红细胞;小红细胞;白细胞的干扰 拟合曲线的作用 对曲线下的面积进行积分计算； 将该面积值校准到参考的PLT计数； 获得与参考方法最具相关性的血小板数值. 在0-70 fL范围的非血小板脉冲被拟合曲线排除于血小板计数之外； 大大增加了血小板的线性范围(0-1,500,000) 从三分群到五分类 三分群： 小细胞 单个核细胞 粒细胞 五分类： 淋巴细胞 单核细胞 中性粒细胞 嗜酸细胞 嗜碱细胞 白细胞三分群法原理 各种单纯电阻法血细胞分析仪的白细胞三分群法原理是根据白细胞体积分布直方图进行分析和计算得到的。经过特殊溶血剂处理的白细胞，可将特定的细胞群进行处理，使得绝大多数淋巴细胞体积缩小，使得中性粒细胞体积适当增大。因此在白细胞分布直方图上出现两个明显的细胞分布峰。左侧体积较小的一群细胞称为淋巴细胞群（LYM），右侧体积较大的称为粒细胞群（GRAN），位于两者之间的称为中间细胞群（MID）， 中间细胞群一般指含有嗜酸粒细胞，嗜碱粒细胞和单核细胞的细胞群。 白细胞五分类法原理 进入90年代中期以来，国外许多厂家已经不满足于三分类型的血细胞分析仪，逐步开始研制和推出具有五分类或更多项白细胞分析技术的全自动型血液分析仪器，比较著名的厂家有：Coulter 、Sysmex 、ABBOTT 、Bayer 、ABX等。各厂家使用的白细胞分类技术多样化， 复杂化，使得白细胞分类技术更加成熟和可靠。而技术的提高也带来了仪器和消耗品（试剂）价格的增加。 五分类VCS技术 运用V、C、S三种探针,在流式通道的某一位点,对通过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检测，以及三维分析,以确定其亚群性质。 V-低频波，分析细胞体积； C-高频波，分析细胞核型； S-激光，分析细胞的颗粒特性。 接近原态的WBC分析 VCS检测 更好的大小测量方法 更好的内部结构测量方法 射频(RF)信号的问题 细胞越大，它发出射频信号所需要的时间就越长； 因此，细胞大小对射频信号具有影响； 这种影响可以减弱对LY、MO、和GR的分辨效果。 将射频转换为阻光性 已知细胞体积，可对射频信号作体积补偿； 使信号的变化只受细胞内部结构的影响； 阻光性测量核的密度和分叶性，使更好地区分细胞。 高频