板蓝根颗粒开发方案试题.ppt

第三章 处方的筛选 第一章 前言 请各位老师批评指正！ 三、毒理评价 板蓝根多糖能够有效地提高小鼠脾指数，说明板蓝根多糖可以明显提高小白鼠机体的免疫功能。 三、毒理评价 小白鼠接受板蓝根多糖注射后，在此浓度范围内，浓度越高，E －玫瑰花环形成率也越高。血液中T －淋巴细胞的比率也就越高，免疫功能越强。 三、毒理评价 1.2.1玫瑰花环形成试验 淋巴细胞悬液的制备: 抓取小白鼠取血，每毫升加20 IU 肝素( 200 IU/mL 肝素生理盐水溶液) 抗凝。取抗凝血1 mL，加入Hanks＇液1 mL，混匀后加在1 mL 淋巴细胞分离液上，2500 r /min，离心10 min，吸出细胞悬液，用Hanks＇液洗涤2 次，弃上清，将沉积细胞用pH7． 4 含10%小牛血清和HanKs 液配成1 × 106 ～ 2× 106 个的细胞悬液。 红细胞悬液的制备: 新鲜采集的绵羊血液用生理盐水洗涤、配成1%的绵羊红细胞悬液。 淋巴细胞与红细胞的作用: 取0． 1 mL 淋巴细胞悬液与0． 1 L 绵羊红细胞悬液，置37 ℃水浴5 min，500 r /min，离心5 min，置4℃冰箱1 － 2 h。 制片观察: 取淋巴细胞与红细胞作用后的细胞悬液1 滴放置玻片上，瑞－姬染色3 min，显微镜观察。凡一个T 淋巴细胞吸附3 个或3 个以上绵羊红细胞的花结即为一个Et －玫瑰花环，计200 个淋巴细胞数，求出Et －玫瑰花环结合率。 三、毒理评价 2 板蓝根对试验性小鼠遗传毒性的影响 2.1 　材料与方法 2.1.1 　药品 2.1.2 　实验动物 昆明种小白鼠雌雄各半, 体重18 ～ 20g 。ICR 小鼠:雄性, 体重18 ～ 22g 。 2.1.3 　板蓝根水煎液的制备 取干燥板蓝根10g , 粉碎后放入500ml去离子水, 浸泡30min ;烧杯中煮沸30min , 收集药液;再反复煎煮2 次, 收集3 次药液, 一起过滤去渣, 沸腾水浴浓缩至10ml , 使药液每毫升相当于生药量1g 。4 ℃冰箱保存待用。 2.1.4 　实验方法 2.1.4.1 　小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验方法 昆明种小鼠随机分为阴性对照组(生理盐水, 腹腔注射);阳性对照组(30mg kg 环磷酰胺, 腹腔注射);中草药水煎液诱变组(分成人临床常用剂量的5 、10 、20 倍组, 灌胃给药)。每组4 只动物, 雌雄各半。 三、毒理评价 将中草药水煎液按所需剂量稀释成0.1ml 只小鼠, 各中草药水煎液诱变组灌胃给药, 灌胃后36h 颈椎脱臼法处死小鼠。阴、阳对照组分别腹腔注射生理盐水、环磷酰胺(0.1ml 只小鼠), 注射后24h 颈椎脱臼法处死小鼠。各组动物参照改良Jagetia 方法制片:常规方法取股骨骨髓腔细胞, 制成小牛血清细胞悬液, 常规涂片, 空气晾干。甲醇固定, 10 %Giemsa 染色。蒸馏水冲洗, 干后镜检。每只动物观察2000 个嗜多染红细胞, 观察含微核的嗜多染红细胞数, 计算其千分率。 2.1.4.2　小鼠精子畸形实验方法 ICR 小鼠阴、阳对照组同微核试验;中草药水煎液诱变组取10 、2.5 、0.5 倍人临床常用剂量。每组6 只雄性动物。 将中草药水煎液按所需剂量稀释成0.1ml 只小鼠, 各中草药水煎液诱变组灌胃给药;同时阴、阳对照组分别腹腔注射生理盐水、环磷酰胺(0.1ml 只小鼠)。隔日给药, 连续3 次。首次给药4 周后颈椎脱臼法处死小鼠。各组动物参照Wy robek方法制片:分离附睾, 剪碎, 滤除组织碎片, 制成生理盐水悬液, 常规涂片。气干后甲醇固定5min , 2 %伊红染色60min 。蒸馏水冲洗, 干后镜检。高倍镜下观察精子形态, 每只动物检查首尾完整的精子1000 个, 按无钩、无定型、香蕉形、胖头和多头多尾分别记数畸形精子数及总的精子畸形百分率。 三、毒理评价 2.2 　实验结果 2.2.1 　板蓝根的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果 从表1 可见, 板蓝根各剂量组诱发的微核千分率与阴性对照(生理盐水)组相比, 均具非常显著性差异(P 0.01)。各剂量组之间未见显著性差异, , 未表现出明显的剂量-反应效应。 三、毒理评价 2.2.2 　板蓝根的小鼠精子畸形实验结果 　 从表2 可见, 板蓝根各剂量组诱发的精了畸形百分率与阴性对照(生理盐水)相比,均具非常显著性差异(P 0.01), 且多头多尾精子所占比例明显增高。各剂量组之间未见显著性差异, 未表现出明显的剂量-反应效应。各剂量组诱发的精子畸形类别及百分率与阳性对照(CP)组相比均无明显差异。 四 临床研究 三、临床研究 1 　临床应用 1.1 　呼吸系统疾病的应用。板蓝根在临床上多用于治疗病毒性感冒发热、咽喉肿痛、流行