实验设计及技术路线.docVIP

竞赛设计及技术路线 研究目的 本课题针对严重影响植物生长的安全因素——软腐害，在前期课题组研究植物生物防治和保护的基础上，选取南方红豆杉为研究材料，通过对南方红豆杉内生菌进行分离和纯化，进一步通过拮抗实验，探索其对半夏软腐病菌、白菜软腐病菌、番茄软腐病菌等植物软腐病菌的抑制效果，以期为半夏等中药材、白菜等农作物等植物软腐病的生物防治提供优良的菌株材料，从而为植物的绿色、安全、健康生长提供理论和技术支撑。 2.研究意义 南方红豆杉，作为植物资源库中的一株奇葩，在材质、药用等方面起着非常重要的作用，鉴于其富产紫杉醇等多种药用活性物质的优点，本课题旨在将南方红豆杉资源进一步优化利用，深入挖掘其在抗菌性、抗病性等方面的潜在价值。植物内生菌作为一种物资源受到了广泛的关注，从内生菌中寻找和发现新的活性化合物已成为国内外研究的又一热点发现了一些有医用、农用价值的菌株和化合物。 实验方案及技术路线 3.1 实验方案 3.1.1样品采集 南方红豆杉植株采集时间为2012年5月至8月, 采集于浙江省金华市婺城区南部山区取采集的南方红豆杉植株根、茎、叶,用自来水充分冲洗后，分装在三个平板上，移至已灭好菌的超净台上，点燃酒精灯，用酒精擦拭手，首先将根用无菌水冲洗2次，再移至70%乙醇浸泡20S，再用2%次氯酸钠浸泡2min，无菌水冲洗3次。保留最后两次冲洗液，取最后一次冲洗液适量于NA培养基中，进行涂布，完成后注明标记。取根的最后第二次冲洗液将茎进行第一次冲洗，最后一次的冲洗液进行茎的第二次冲洗，依次进行上述操作。 4.研究进度 日 期 内 容 6月2日6月方案设计与实验器材材料的准备 月日7月采样 8月1日-8月 拮抗菌的活性鉴定 9月1日-9月15日 实验数据整理， 9月16日-10月20日 撰写实验报告，撰写文章 预计成果 本课题研究了南方红豆杉内生菌对影响植物安全生长的软腐病的拮抗效果，试图通过生物防治手段，实现对半夏、白菜、番茄等植物软腐病的生长直到抑制作用。通过本实验实现以下两个目标：①从南方红豆杉中分离和纯化细菌、真菌和放线菌，通过统计分析南方红豆杉内生菌的菌群类型；②进一步确定以上分离的内生菌对半夏软腐病菌的拮抗效果；③与已有研究进行比较分析。 Soft rot, as a serious impact on plants ( such as pinellia, tomato, cabbage ) growth factors on the biological environment of safety, security and stability has great destructiveness. The soft rot by chemical means. This review summarized the soft rot and Taxus endophytic fungi in plant disease control aspects of progress, in order to provide some reference for biological safety control 。 整理实验结果和分析 调查、统计其中的细菌、放线菌、真菌的种类 比较不同内生菌的拮抗活性 采取滤纸片法、对峙法等对分离的内生菌进行植物软腐病菌的拮抗活性鉴定 采取不同的分离方法对南方红豆杉内生细菌、真菌、放线菌进行分离和纯化 选取南方红豆杉根、茎、叶等新鲜组织