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基因工程期末考材料 题型：术语解释、简答题、论述题、可能有选择题或填空等。 试卷一 术语解释（30分，每题3分,作于答题纸） 1. cDNA： cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNAcccDNA: cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 基因文库指某个生物的基因组 DNA 或 cDNA 片段与适当的载体在体外通过重组后，转化宿主细胞，并通过一定的选择机制筛选后得到大量的阳性菌落（或噬菌体），所有菌落或噬菌体的集合。Biochip）是指通过机器人自动印迹或光引导化学合成技术在硅片、玻璃、凝胶或尼龙膜上制造的生物分子微阵列，根据分子间的特异性相互作用的原理，将生命科学领域中不连续的分析过程集成于芯片表面，以实现对细胞、蛋白质、基因及其它生物组分的准确、快速、大信息量的检测。 5.感受态细胞（competent cell）: 能够吸收 DNA 的细胞，称作感受态细胞（competent cell） DNA探针: 是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。 7. 穿梭载体： 穿梭载体是能够在两类不同宿主中复制、增殖和选择的载体。 8. 筛选标记基因：?筛选标记主要用来区别重组质粒与非重组质粒，当一个外源 DNA 片段插入到一个质粒载体上时，可通过该标记来筛选插入了外源片段的质粒，即重组质粒。-白斑筛选: 含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。 10．基因操作（gene manipulation）：是指对基因进行分离、分析、改造、检测、表达、重组和转移等操作的总称。 二、简答题 （55分，作于答题纸） 1. 何谓Klenow片断？Klenow片断在基因工程中有哪些用途？（8分） ??Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase Ⅰ 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去 5--3 外切活性的肽段后的大片段肽段，而聚合活性和 3--5 外切活性不受影响。也称为 Klenow 片段（Klenow fragment） E.coli DNA 聚合酶 Ⅰ 大片段（E.coli DNA polymerase Ⅰ large fragment） 76kDa 。??? Klenow DNA 聚合酶的活性与 E.coli DNA 聚合酶 Ⅰ 的活性是一致的。由于没有 5--3 外切活性，使用范围进一步扩大。?????① 补平 3 凹端 DNA 。使用单纯的 DNA 合成活性。注意要加足够的 dNTP ；如果使用带标记的 dNTP ，则可对 DNA 进行末端标记。???? ② 抹平 DNA 3 凸端。在 3--5 外切活性作用下，可切除突出的 3 凸端。注意必须加足量 dNTP ，否则外切活性不会停止。但由于 T4 和 T7 DNA 聚合酶具更强的 3--5 外切活性，现在已经取代了 Klenow DNA 聚合酶的这一作用。???? ③ 通过置换反应对 DNA 进行末端标记。但是该作用也已经被 T4 或 T7 DNA 聚合酶代替；它还可以在补平 3 凹端的过程中进行标记。???? ④ 在 cDNA 克隆中合成第二链。???? ⑤ 随机引物标记。???? ⑥ 应用于 Sanger 双脱氧链末端终止法的 DNA 测序（已经被 T7 DNA 聚合酶取代）。???? ⑦ 应用于 PCR 反应，现在已经被 Taq DNA 聚合酶等取代。???? ⑧ 在体外诱变中，用于从单链模板合成双链 DNA 。 2、什么是“星星活性”？请简述酶切时如何避免产生星星活性”现象。（8分）（star activity）在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星号活性。引起星星活性的因素有甘油浓度高（5%）100U/(l）25mM） pH 值过高（8.0） PMSD （）dimethylacetamide）dimethbylformamide） sulphalane 等等，或是用其它二价阳离子如 Mn++ 、Cu++、Co++ 或 Zn++ 代替了 Mg++ 。但不同的酶对上述条件的敏感性不一样，如 PstⅠ 比 EcoRⅠ 对高 pH 更敏感，但后者对甘油浓度更敏感。????抑制星星活性的措施有许多，如减少酶的用量（可避免过份酶切），减少甘油浓度，保证反应体系中无有机溶剂或乙醇，提高离子强度到 100～150mM （） pH 至 pH7.0 ，以及保证使用 Mg++ 作为二价阳离子。 3. PCR技术的工作原理是什么 ？用T－载体