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多重PCR HCV基因分型与临床关系的研究 　　【摘 要】目的：研究不同基因型丙型肝炎病毒感染后丙肝患者的临床特征。 方法：运用多重PCR（RT-PCR和NESTED-PCR），使1a 、1b、2a、2b和3a在一管内扩增，对93例血清HCV RNA≥1.0×103拷贝/ml的标本，设计HCV 的C区特异性引物，采用Trizol浓缩RNA进行单管巢式PCR分型，并对不同基因型患者的临床资料进行比较。结果：①HCV1b在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化患者中，分别为70%（14/20）、64.06%（41/64）、71.43%（5/7），HCV2a所占比例分为25%（5/20）、23.44%（15/64）、14.29%（1/7），HCV1b/2a混合型所占比例分别为5%（1/20）、7.81%（5/64）、14.29%（1/7）。②在ALT≥150U/L的患者中，HCV1b占54.84%（34/62），HCV2a占23.81%（5/21）。结论：HCV1b在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化患者中占绝对优势，HCV1b患者肝损伤重于HCV2a患者。 　　【关键词】丙型肝炎病毒；基因型；多重PCR 　　【中图分类号】R450 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2012）13-0109-02 　　HCV是一种全球性传染的、给人类建康带来极大威胁的病原体。我们运用多重PCR HCV 基因分型技术[1] ，对乐山地区93例HCV RNA≥1.0×103拷贝/ml的血清标本进行了基因分型，探讨丙肝患者基因分型与感染途径的关系，了解不同临床类型丙肝患者HCV基因型分布和频率。 　　1 资料与方法 　　1.1 血清标本 　　93例我院2010年1月至2010年10月门诊及住院患者抗-HCV阳性及HCVRNA阳性血清标本，年龄5-84岁，男67例，女26例。阴性对照为HCV RNA阴性血清6例。 　　1.2 试剂仪器 　　抗-HCV检测采用上海科华的ELISA检测试剂盒，酶标仪为BIO-RAD 680，基因扩增仪为DA 7600，荧光定量检测为达安基因提供的配套试剂盒，其他试剂自备。 　　1.3 方法 　　先对血清标本进行抗-HCV OD值的测定和荧光定量PCR检测，93例均是阳性的血清参照文献[1]进行基因分型。 　　1.4 统计学分析 　　样本均数以xˉ±S表示，均数、率比较采用u、x?检验。 　　2 结果 　　不同临床类型丙型肝炎患者基因分布及比率见表1。可见，HCV1b在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化患者中中的百分比远远高于其他基因型，说明丙肝患者主要感染HCV1b。 　　HCV1b、HCV2a型丙肝患者临床资料比较见表2。HCV分型与性别和年龄无密切关系。HCV1b患者ALT高水平比例明显大于HCV2a患者，说明肝损伤重于HCV2a患者。不同型别抗HCV OD值在≥2的范围内检出率不等，HCV2a型明显高于HCV1b型。 　　3 讨论 　　HCV是引起人类急慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要病原之一[2]。HCV RNA基因分型目前常使用的检测方法较多，如直接测序、LiPa、酶切法及引物特异性电泳法等，由于方法学较为复杂[3-10]，因此该基因分型主要在较大的专科医院开展，基层医院无法展开。我们将多重PCR引物特异性分型方法运用到临床工作中，简单快速地对乐山地区93例丙肝阳性血清进行了分型。研究表明，HCV分型与性别和年龄无密切关系。HCV感染后其临床表现轻重与感染基因型有一定关系。我们比较了1b和2a患者的临床资料，HCV1b患者在急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化患者中占绝对优势，ALT高水平比例明显大于HCV2a患者，说明肝损伤重于HCV2a患者。不同型别抗HCV OD值在≥2的范围内检出率不等，HCV2a型明显高于HCV1b型，这可能与HCV1b型病毒株免疫原性比HCV2a型病毒株免疫原性低的缘故。由于HCV基因型与肝病严重程度有着密切的关系，并且对抗病毒治疗产生很大影响，因此，HCV基因分型可为HCV感染者的诊断和治疗提供重要的科学依据[11]。通过临床资料，我们发现：手术和输血是丙肝感染的重要途径，而频繁血透和静脉吸毒也是丙肝感染的主要来源[12]。我们还发现了1b/2a混合型感染3例，其中2例为反复大量输注血制品，一例为多次血液透析导致。这是由于HCV免疫原性低下，感染后诱发的免疫力低下，时间短。不同型之间无交叉免疫保护，所以HCV可再次或混合感染。正是由于HCV存在输血及非输血多种途径的感染，严格规范手术及血透等创伤性医疗操作，器械及设备的严格消毒就尤为重要。应加强对高危人群的预防监测，加强献血员的病原学筛查，加强对疾病的宣传控制。 　　参考文献 　　[1] 庄辉.重视丙型肝炎的研究[J].中华肝脏病杂志，2004，12（2