GRP及GRPR在结直肠癌、黏膜炎症中的表达及其意义.docVIP

GRP及GRPR在结直肠癌、黏膜炎症中的表达及其意义 　　[摘要] 目的 检测胃泌素释放肽（GRP）及其受体（GRPR）在结直肠癌、黏膜炎症中的表达及其意义。方法 选择本院2009年1月～2012年10月经病理诊断为结直肠癌患者60例的病理标本为研究组，选取同期病理诊断为黏膜炎性改变患者60例的病理标本为对照组，采用免疫组化方法，分别检测结直肠癌组织及黏膜炎性组织中GRP及GRPR的表达情况。 结果 研究组GRP及GRPR表达阳性率明显高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）；结直肠癌Duks分期A、B期患者GRP及GRPR表达阳性率明显低于C、D期患者（P0.05）；低分化癌患者GRP及GRPR表达阳性率明显高于分化及高分化癌患者（P0.05）。 结论 GRP及GRPR在结直肠癌中表达明显升高，并且随着肿瘤恶性程度增高，GRP及GRPR表达增加，可为临床结直肠癌诊断治疗提供新的方向。 　　[关键词] 胃泌素释放肽；胃泌素释放肽受体；结直肠癌 　　[中图分类号] R735.3 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）06-0045-03 　　胃泌素释放肽（GRP）是一种可调节其他胃肠道激素分泌或功能肽类的物质，是由27 个氨基酸组成的肠脑肽，主要存在于正常人脑、胃的神经纤维及肺的内分泌细胞中[1]。研究显示GRP在人类肿瘤细胞中呈明显异常表达，在胃癌、结肠癌、大肠癌、前列腺癌等癌组织中均有表达[2]。因此有学者认为GRP及其受体（GRPR）可能对肿瘤的发生、发展有特殊作用，GRP与其受体GRPR结合后通过广谱生理和病理学效应调节肿瘤的进展、细胞增殖、血管形成及侵袭等过程[3]。本文选择结直肠癌患者病理标本为研究对象，探讨二者在结直肠癌中的表达及意义。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选择本院2009年1月～2012年10月经病理诊断为结肠癌或直肠癌患者60例的病理标本为研究组，其中，男38例，女22例，年龄43～75岁，平均（62.0±5.2）岁；其中结肠癌41例，直肠癌19例；肿瘤Duks分期：A期12例，B期31例，C期10例，D期7例。组织分化程度：高分化腺癌28例，中分化腺癌18例，低分化腺癌14例。选取同期病理诊断为黏膜炎性改变的60例患者的病理标本为对照组，其中，男40例，女20例，年龄35～73岁，平均（60.5±6.4）岁，两组患者性别、年龄等一般情况比较，差异无统计学意义。 　　1.2 方法 　　1.2.1病理切片 用石蜡切片机将入选病理标本连续切片，每片厚约5 μm，并将每个病理标本所切去的切片分成两部分，分别进行GRP及GRPR免疫组织化学染色。 　　1.2.2病理标本的免疫组织化学染色（ABC法） ①已标记的石蜡切片放入57℃烤箱30 min脱蜡，然后依次放入二甲苯×3次、100%酒精×2次、95%酒精×2次、80%酒精、70%酒精水化；②将各标本的病理组织切片入蒸馏水中漂洗；③将病理组织切片放入80℃水浴箱抗原修复；④稍冷却后用0.01MPBS漂洗；⑤用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭；⑥加入0.01M PBS中漂洗×2次；⑦加入封闭液（2%马血清）中室温下封闭，甩去多余液体；⑧滴加兔抗胃泌素释放肽多克隆抗体（按1∶100稀释）或兔抗胃泌素释放肽受体多克隆抗体（按1∶100稀释）， 置常温下过夜；⑨加入0.01M PBS中漂洗×3次；⑩加入抗兔生物素化二抗，室温1～2 h；{11}加入0.01M PBS中漂洗×3次；{12}加ABC 2 h；{13}DAB显色液（即用型DAB底物缓冲液、DAB显色液、底物溶液按1∶1∶1 稀释）中染色至棕黄色，PBS终止染色；{14}将显色后的片子用蒸馏水冲洗3遍后，浸泡于苏木精中进行复染，盐酸乙醇分化30 s，切片避灰尘干燥一晚；{15}贴片晾干后依次入70%酒精中、80%酒精中、95%酒精中×2次、100%酒精中×2次脱水；{16}再入二甲苯中透明处理×3次，中性树胶及盖玻片封片。 　　1.3 镜下观察 　　选择染色均匀、清晰、结构完整的切片为观察对象，在高倍镜下观察。阳性信号为棕褐色或棕黄色、淡黄色颗粒，定位于细胞浆。 　　1.4 统计学方法 　　数据录入SPSS 17.0统计学软件，计数资料以百分比表示，组内及多组间比较行χ2检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 两组GRP及GRPR表达情况比较 　　研究组GRP及GRPR表达阳性率明显高于对照组，差异有统计学意义（P0.05），见表1。 　　2.2 研究组不同病理分级、组织分化程度患者GRP及GRPR表达情况 　　研究组中结肠癌及直肠癌患者GRP及GRPR表达阳性率差异无统计学意义（P