第七节 副溶血性弧菌课件.pptVIP

V.P反应 检测某种细菌分解碳水化合物产生乙酰甲基甲醇[CH3CH（OH）COCH3]的反应。通常把细菌培养在葡萄糖蛋白胨液体培养基中，加入强碱可见显有红色。此反应用于细菌的鉴别 第 七节、副溶血性弧菌检验 一、生物学特性 二、致病性 三、检验方法 第 七节、副溶血性弧菌检验 一、生物学特性 1、形态与染色 革兰氏阴性无芽胞多形态杆菌或稍弯曲弧菌 ，有时呈棒状、甚至球状、丝状等。一般两极浓染。单端鞭毛，长度约为菌体的2倍，运动活泼。无芽胞、无荚膜。 2、培养特性 本菌对营养要求不高，在普通的琼脂或蛋白胨水中均可生长 需氧特别强，在厌氧条件下生长非常缓慢 嗜盐，在2~３%NaCL培养基中生长最好，无盐或食盐10%不能生长。 最适温度36℃，pH7.5~7.8 在肉汤、蛋白胨水等培养基中呈现浑浊，表面形成菌膜 在固体培养基上菌落呈圆形凸起，混浊不透明，表面光滑，较湿润，边缘不整齐。 在血平板上可见溶血环。 3、生化特性 分解葡萄糖产酸不产气，不分解乳糖，蔗糖。 H2S（－）、V-P（－）、靛基质（吲哚试验）（+）、精氨酸（－） 甲基红（+）、赖氨酸（＋）、溶血＋/- 1、吲哚试验( indol test) 细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。 色氨酸→ 吲哚（无色）＋对二甲基氨基苯甲醛→ 玫瑰吲哚（红色，+ 大肠杆菌） 不产吲哚（无色，- 产气杆菌） 试验方法：取培养24h培养液，先加入少量乙醚，摇动试管以提取和浓缩吲哚，待其浮于培养液表面后，再沿试管壁徐缓加入吲哚试剂数滴，在接触面呈红色，即为阳性。 应用：用于肠道杆菌的鉴定 * 2、尿素酶（Urease，脲酶）试验 有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。 酚红： 黄色→ 红色（+ 普通变形杆菌） 黄色（- 大肠杆菌） 试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇匀，于36±1℃培养，观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养24h左右，观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。 * 3、氨基酸脱羧酶的测定 有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基释出，生成胺类和二氧化碳。此反应在偏酸的条件下进行，当培养基含胺类时呈碱性反应，使指示剂变色。接种与观察结果：用幼龄培养液作为菌种，直接接种。接种后封油，对照管与测定管同时接种封油。肠肝菌科的细菌于37℃培养4天观察。 当指示剂（溴甲酚紫）呈紫色或带红色调的紫色者为阳性，呈黄色者为阴性。对照管应呈黄色反应。 * 4、三糖铁（TSI）琼脂试验 试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。 培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚红 本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。 只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 * O抗原（菌体抗原）：O1~O13 13种。 H抗原（鞭毛抗原）： K抗原（荚膜抗原）：K1~K71 65种。 （ 缺编：K2 、 K14 、K17、 K35、 K62） 血清分型：所有副溶血性弧菌的H 抗原均相同，但是O 抗原和K 抗原存在差异，以13种O抗原及65种K抗原将其分为13个群和845个型。 4、抗原结构结构 二、致病性 1、致病因素 ★侵袭力：活菌(105~107/g)，可使人致病 . ★产生溶血毒素：内毒素，成分是脂多糖，100℃30min不被破坏。 2、媒介食品 主要是海产品（鱼、虾、蟹、蛤等），含盐量较高的食物亦可带菌。 3、所致疾病 食物中毒、急性胃肠炎、败血症等。 二、致病性 4、预防措施 （1）海产品加工前用消毒水冲洗干净，接触过海产品的厨具、容器和手及水池等均要洗刷干净，以免污染食品 （2）若要吃凉拌菜应充分洗净，现在沸水中烫后，加醋，放置10min后，再放其他调味剂 （3）严格执行生熟食品分开制度 （4）剩饭菜，在食用前要回锅热透 1、检验标准：GB/T 4789.7-2008 副溶血性弧菌检验 2、培