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碱性磷酸酶Km值测定 一、实验目的 1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响 2.了解米孟方程、Km值的物理意义及双倒数作图求Km的方法。 二、实验原理 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 本实验以碱性磷酸酶为样品： 碱性磷酸酶能分解磷酸苯二钠产生酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化生成红色的醌衍生物，根据红色的深浅可测出酶活力的高低，测定不同浓度底物时的酶活性。 三、操作方法 参见实验讲义 四、思考题 1.测定Km值还有哪些方法？ 2.测定Km值有何实际意义？ * * [S] V Vmax 当反应速度为最大反应速度一半时 Km值的推导 Km＝[S] ∴Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。 2 ＝ Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 Vmax[S] Km+[S] V = （林－贝氏方程） + 1/V= Km Vmax 1/Vmax 1/[S] 两边同取倒数
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