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关于冻干细菌的问题，有没有人指导一下有没有大侠知道如何冻干细菌，我们试过用肉汤和生理盐水做载体，-70度冻一夜，然后进行冻干，不过总是冻成贴壁的膜状，希望可以冻干成卫生部质控品那种粉末状，请问有没有人可以知道一下收集你需要的菌体量，液体培养后离心合并菌体，用生理盐水或缓冲液离心洗涤菌体，尽量将多余的生理盐水移去，之后于-20度预冻几个小时就可以，再放入真空冷冻干燥机内冻干，一般过夜就可以，或者更长20小时左右，是菌体量而定，可能你冻干的时间不够或者离心不够充分，希望对你有帮助！ 在恶劣环境下生长时,某些面包酵母菌种体内能够积累大量海藻糖.该论文针对这种情况,通过高温诱导手段使面包酵母大量积累胞内海藻糖.并对海藻糖的几种分析方法进行了比较,建立了有效的分析手段.冷冻干燥是保存微生物的一般方法,但必须加入一定的保护剂,该论文用海藻糖作为保护剂对双歧杆菌和脂肪酶分别进行了冷冻干燥,考察保护后双歧杆菌的冻干存活率和存放存活率.实验中加入了不同的保护剂如脱脂奶粉和谷安酸钠等物质,同以海藻糖为保护剂的冻干菌粉相比较,同时对各种不同的保护剂加入不同的量,探索保护的规律,以找出最优条件.最后,对海藻糖保护双歧杆菌的机理进行了探索,结果表明,海藻糖能有效地保护双歧杆菌可能是海藻糖中的羟基和双歧杆菌细胞膜中的磷脂端基以氢键形式结合,代替了细胞膜在正常情况下的结构.而且由于海藻糖的加入,使细胞膜的相变温度降低,在再水化过程中避免了因细胞膜相变引起的致命损伤. 以嗜酸乳杆菌KLDS AD1和KLDS AD2和双歧杆菌KLDS 2.0604为研究对象,研究冻干保护剂脱脂乳、蔗糖、海藻糖、葡聚糖和Vc钠盐对各菌株冻干存活率的影响,通过单因素、正交实验筛选出优化组合,得出冻干存活率均在87.81%以上。并研究采用优化后的冻干保护剂制备的各菌粉在4℃和25℃下的保存稳定性。保存稳定性实验表明:3株益生菌菌粉在4℃和25℃下保存12个月后,菌粉的活菌数最多下降2个数量级,其活菌数均在1.0×108cfu/g以上。 黄登峰. 重组米黑根毛霉脂肪酶全细胞催化生物柴油的合成[D]. 华南理工大学, 2010. 南君勇. 真空冷冻干燥技术制备酵母菌菌粉的研究[D]. 天津大学, 2007. DOI:10.7666/d.y1359420.菌体分离是制备活菌菌剂重要的中间工艺环节，目前用于细胞分离的方法主要有离心和超滤。研究表明，超滤效果优于离心，而超速离心效果优于普通离心。但是，离心比超滤操作简便，设备清洗和消毒方便，不易污染，其应用较超滤普遍。 值得注意的是离心过程中：一方面，由于离心力机械作用的影响，可能造成部分菌体死亡；另一方面，部分菌体必然残留在上清液中而流失。如果离心工艺掌握不当，菌体死亡率和流失率随之增高，使活菌收得率大大降低，直接导致最终制得的菌剂中活菌含量下降而影响产品质量。 酵母菌在 6000rpm（10min）的离心条件下，有最大的离心收得率 78.64％，8000rpm（20min）的离心条件下，离心收得率最低，仅为 62.06％。酵母菌适宜离心的离心时间为 10min，离心转速为 6000rpm。在相同转速下随着离心时间的增加，菌体离心收得率下降，而相同离心时间随着转速的变大，菌体离心收得率呈先上升后下降的趋势。这说明离心时间的增加虽然可以减少菌体随上清液的流失，但是对菌体造成的死亡影响更大；离心转速在 4000rpm～6000rpm范围内增大，可以有效地减少菌体随上清液地流失，且对菌体造成的死亡影响较小；离心转速在 6000rpm～8000rpm范围内增大，对菌体造成的死亡影响大于减少菌体流失的影响。因此，酵母菌适宜离心的离心时间为 10min，离心转速为 6000rpm（菌体初始活菌数浓度 5.43×109cfu/ml，离心腔温度－8～4℃）。 本实验中选择的保护剂有：甘油、蔗糖、L－半胱氨酸盐酸盐、脱脂奶粉、阿拉伯胶、β－环状糊精、吐温－80。虽然有报道说明，海藻糖与侧金盏花醇为很多菌体的最佳冷冻干燥保护剂，后来确定酵母菌的复合冻干保护剂配方组成为 5％脱脂奶粉、5％甘油、10％蔗糖、15％β－环状糊精。 2．3．2．4注意事项加入酒精时要注意均衡缓速，同时充分震荡，否则溶液将出现乳白色絮状物，后期变色观察造成影响。制备橄榄油乳化液时，尽可能提高乳化程度，会比较有利于橄榄油在脂肪酶的作用下分解。指示剂显色不太明显，当滴定接近终点时，需要仔细观察溶液颜色的变化，以防超过滴定终点。 pbs的作用 PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称，不仅伪狂犬病毒要用它稀释，一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性；生理盐水不具有调整pH的作用，对完整