第五章饲料中脂肪酸含量的测定.pptVIP

* 常规脂肪提取方法 1. Soxhlet (索氏)萃取法的优缺点 - 优缺点 不需要加水分解节省时间 仪器价格低廉 广范围的应用 蛋白质、碳水化合物含量高时不适用 随溶剂的种类、提取时间的变化结果不同 其他亲水性物质也一块提取 磷脂只能部分提取 需要大量的溶剂，制动化不易 - 应用分支 一般食品行业 为其他分析而除去脂肪 * 2. 酸水解(acid hydrolysis) 酸水解的必要性 直接用Soxhlet(索氏)提取法不能把所有的脂肪提取出来 碳水化合物、蛋白质等把脂肪包裹的情况 植物细胞或starch-membrane(淀粉膜)中掺杂的情况 非溶性胶质把脂肪包裹的情况(牛奶、乳酪、奶油) 乳制品、谷类、面包、蛋类、鱼类、肉类、豆腐 原理 试样经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得总脂肪含量。酸水解法测得的为游离及结合脂肪的总量 - 酸分解过程 加入4M HCl时样品的matrix 成分分解 过滤后脂肪分离 用热水洗涤 干燥 之后提取, 干燥后测量重量变化计算脂肪含量 常规脂肪提取方法 * 3. 其他 fat 分析方法 Phospho-, di-, monoglyceride(磷脂、甘油二酯、甘油单酯)比起一般只有三个脂肪酸的甘油三酯具有低的热量 各脂肪含有磷脂(Phosphatide)的混合物时磷脂可以分离为脂肪但是在提取过程中会有部分的损失因此完美的提取很困难 原理 试样经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得总脂肪含量。酸水解法测得的为游离及结合脂肪的 总量  ? 用高沸点的溶剂提取 → KOH? ?? → 加入酸溶液 → 转换为脂肪酸 → 决定脂肪含量 常规脂肪提取方法 * 原理 为了脂肪样品的气象色谱分析，首先要分离为单一的脂肪酸状态 脂肪(或者脂类、不溶于水但是溶于有机溶剂的特性的物质)大概分为单纯脂肪( Triglycerides, diglycerides, monoglycerides, free fatty acids cholesterol esters, cholesterol and waxes esters)和极性或者复合脂肪(磷脂及糖脂) 脂肪可以通过多种有机溶剂从组织中提取但是对于组织的酶类和非活性化的脂肪要完全提取出需要注意 脂肪酸提取方法 * 具有细胞壁的复合脂肪具有hydrogen bond或 hydrophobic forces 及ionic bond的蛋白质及碳水化合物的细胞内的其他化合物连接，因此不容易提取 从组织中提取脂肪需要用像chloroform(氯仿)一样可以溶解脂肪还可以与 methanol一起把脂肪和组织之间的matrix之间的相互作用给分解的溶剂 糖(sugars)、氨基酸及盐(salts)等non-lipid contaminants需要通过washing procedure从提取物中剔除掉，这样的方法可以参考Folch, Lees 及 Stanley(1957)的建议 脂肪酸提取方法 * 用chloroform-methanol( 2:1, v/v)把提取物进行摇荡后加入占?体积的saline solution(0.88% in water)进行平衡 这时混合物分成2个层, 下层为氯仿层包含所有脂肪，上层为methanol-water phase包含non-lipid contaminants 方法: 2. 脂肪提取 样品: flax seed(亚麻籽), margarine(人造黄油), ground beef, Blank (不含所测物质) 试剂: 1) Folch solution: chloroform: methanol (2:1, V/V) 2) 0.88% NaCl 提取步骤: 1) 准确称取1.0g ground beef, 0.2g的flax seed 或 0.1g的 margarine 放入50ml Teflon lined screw cap tube后加入 20ml的 Folch solution。 脂肪酸提取方法 * 2) Homogenizing 3) 拧紧盖子并在 在室温1~2h 摇晃 (必要时加入 N2) 加入 4ml的0.88% NaCl，并充分混合 1500rpm， 4℃ ，10min centrifuge. 分2层. 记下Chlorform层的体积，并把上层(methane+water)吸取掉，下层则包含所要提取的脂肪 这样分离的脂肪用于分析如下: Total crude lipid analysis Fatty acid analysis Lipid class separation by TLC and their f