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第5章 植物组织培养实际应用技术 5.1 花卉离体繁殖技术 5.1.1 蝴蝶兰 （1）形态特征与生物学习性 蝴蝶兰属于单茎性气生兰，植株上极少发育侧芽，比其他种类的兰花更难进行常规无性繁殖。关于蝴蝶兰大量的研究始于20世纪60年代以后，利用不同的外植体如茎尖、茎节、叶片等均可通过诱导原球茎进行快繁。 （2）蝴蝶兰离体繁殖技术 1）外植体的选择、消毒处理与接种 蝴蝶兰的种子、花梗侧芽、花梗节间、茎尖、茎段、叶片、根尖等部位均有培养成功的报道，方法各异，难度各有高低。 2）初代培养 初代培基基:B5+GA2.0mg/L+NAA0.1mg/L， 培养条件：25±2℃，接种后遮光放置4-5d，而后每天光照12h。 3）继代培养 继代培养基：B5+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L中，培养4d后愈伤组织表面出现绿色芽点，分化成丛生芽。 4）壮苗生根培养 生根培养基1/2MS+IBA1.2mg/L+NAA0.05mg/L中培养，10d后切口基部开始长出白色的根状突起，25d后，每株生根4条以上，生根率可达到95％。 5）驯化炼苗与移栽 移栽前5d，将试管苗转移到驯化室，2d后将封口膜打开，使幼苗完全与空气接触，避免高温和强光直接照射，3d后即可移栽。 移栽时洗除基部培养基后，将苗放在1000倍的多菌灵水溶液中浸泡1-2min，插入消毒的苔藓基质中，并用薄膜覆盖保湿。保持温度25℃，相对湿度70-80％，移栽成活率可达90％以上。 5.1.2 百合 （1）形态特征与生物学习性 百合是百合科百合属植物的统称，为多年生的草本植物。鳞茎无皮，广卵形，直径5-8cm，白色或黄白色，茎高30-90cm，直立，叶多而散生，披针形，叶色从浓绿到淡绿色，光滑。 百合一般喜微酸性土壤，土壤pH值在5.5-6.5最为适宜。其生长的最适温度为15-25℃， （2）百合离体繁殖技术 1）外植体的选取、灭菌和接种 优选生长健壮、开花性状良好的植株。在无菌条件下，放入70%酒精处理5～30s，再转入0.1%升汞溶液中5～15min，无菌水洗3～4次，即可进行无菌操作切块(段)接种。 2）初代培养 初代培基基:MS＋BA1.0mg/L＋NAA0.1mg/L。 培养条件：22-25℃，10-12h，1200-3000x。 3）继代培养 将小鳞茎或不定芽转接到增殖培养基中进行继代培养，继代培养基MS+NAA0.3-0.5mg/L+BA1.0mg/L，培养条件同上。2周后，小鳞茎和不定芽分化出许多大小不等的鳞茎。 4）生根培养 将生长健壮的百合鳞茎苗分成单株，去除基部的愈伤组织后接种于生根培养基，生根培养基MS+NAA0.3-0.5mg/L或1/2MS+IBA0.2-0.5mg/L。待根长到1-2cm时，即可驯化移栽。 5）驯化移栽与移栽 在试管苗移栽前，放在4-10℃低温条件下驯化锻炼2-3周，这样移栽后的幼苗生长更加健壮。移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或泥炭土加蛭石的混合基质。保持移栽温度20-25℃。同时，移栽后注意湿度管理，相对湿度控制在80％-90％。还要防止烈日曝晒，后期幼苗不宜浇水过多，并及时喷洒药剂预防病虫危害。成活率可达到90％以上。 5.1.3 香石竹 （1）形态特征与生物学习性 香石竹即康乃馨，又名狮头石竹、麝香石竹、大花石竹、荷兰石竹，为石竹科、石竹属植物多年生宿根花卉。 香石竹喜阴凉干燥，阳光充足与通风良好的生态环境。耐寒性好，耐热性较差，最适生长温度14-21℃，温度超过27℃或低于14℃时，植株生长缓慢。宜栽植于富含腐殖质，排水良好的石灰质土壤。 （2）香石竹离体快繁技术 1）外植体的选取、灭菌和接种 选取品种优良、无病虫害、生长势强、商品性状好的优良单株作取芽植株。无菌条件下放入0.1%升汞溶液中消毒15～20min，取出后用无菌水中冲洗3次。无菌条件下，切取含有2～3对叶原基、0.3～0.5mm的茎尖接种到诱导培养基上。 2）初代培养 初代培基:MS+BAl.0mg/L+KTl.0mg/L+NAA0.5mg/L 培养条件：23-25℃，光照16h/d，光强2000Lx 3）继代培养 继代培养采用丛生芽方式进行增殖，将要进行增殖扩繁的试管苗转接到MS＋BA 0.2～0.5mg/L＋NAA 0.1～0.3mg/L继代培养基上进行培养。 4）生根培养 将高度达到2cm左右，生长正常的小芽切下，接种于1/2 MS＋NA