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2、细菌的形态 (1)球菌 (2)杆菌 (3)螺旋菌 * * * * * a、单个细菌 VS 菌落 菌落是在固体培养基上(内)以微生物母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞的集团。 b、细菌形态 VS 菌落特征 菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等。 c、形态与菌龄、培养条件等有关。 * * 3、细菌大小的表示方法 测量单位是微米,符号为μm。 球菌:直径表示,0.5μm~2.0μm。 杆菌:长×宽表示,(0.5~1.0)μm×(1~5)μm 大小测量工具:显微测微尺(任务三) * * 显微测微尺 * * 4、细菌的细胞结构 * 细菌细胞结构 细菌的特殊结构 鞭毛 * 荚膜 * * 芽孢 芽孢的形态及其在细胞中的位置 细菌芽孢的各种类型 5、细菌的繁殖方式 一般为无性繁殖,二分裂法(简称裂殖) 细菌分裂过程: ①核分裂 ②形成横隔壁 ③子细胞分离 * 四、放线菌及其他原核微生物 1、放线菌 * 一类具有丝状分枝细胞和无性孢子的G+原核微生物,由于放线菌菌落中的菌丝常从一个中心向四周辐射状生长因而得名为放射菌。 放线菌的菌丝结构 * * 2、支原体 3、衣原体 4、立克次氏体 * * 染色与细菌形态观察 为什么要染色? 染色的目的 1、强化观察对象与背景的反差 2、微生物鉴别、组织的形态观察 * 细菌染色法: 一、简单染色法 简单染色法是利用单一染料使菌体进行染色的方法。此法操作简便,适用于菌体一般形状和排列的观察,但不能辨别其构造。 基本流程:玻片准备→取菌及涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检。 * 涂片 干燥 固定 染色 水洗、吸干 镜检 简单染色 1、取菌图片时,应注意无菌操作技术 * 2、干燥与固定的区别 染色前必须固定细菌 目的: 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上; 二是增加其对染料的亲和力。 常用的有加热和化学固定两种方法。 固定时尽量维持细胞原有的形。 * 3、染色与水洗 染色 以刚好覆盖菌膜为宜 放置几分钟 水洗 不能直接冲洗涂面 水流要小 4、干燥与镜检 干燥 室温自然干燥或吸水纸吸干(只能按压,不能来回擦) 镜检(低倍→高倍→油镜) 高倍镜观察后,将物镜旋至八字形 从空隙处滴加一滴香柏油在菌膜上 从侧面观察,将油镜慢慢旋到光孔上方,浸在油中 调节细调节螺旋至看到清晰的图像 完毕后先用擦镜纸擦去香柏油,再用擦镜纸蘸取少许二甲苯擦去残留油迹,然后用擦镜纸擦去残留的二甲苯,水洗即可(不需要用酒精擦拭) 二、革兰氏染色法 革兰氏染色的差异主要是由于阴性与阳性细菌细胞壁的差异所应起的。由于染色后细菌与环境形成鲜明对比,可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征,而用以分类鉴定。 * 革兰氏染色与细胞壁 原理(细胞壁结构和成分的不相同) G+ 结晶紫-碘 紫色 G- 结晶紫-碘 红色 初染 媒染 脱色(壁厚且致密 酒精不能洗脱) 复染 初染 媒染 脱色(壁薄且疏松 酒精能够洗脱) 复染 1、革兰氏染色的原理 革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌细胞壁的构造 革兰氏阳性细菌 革兰氏阴性细菌 细胞膜 肽聚糖 磷壁酸 脂磷壁酸 肽聚糖 周质空间 细胞膜 外膜 脂多糖 孔蛋白 磷脂 脂蛋白 膜蛋白 膜蛋白 特 征 G+细菌 G-细菌 肽聚糖 层厚,厚,紧密 层薄,疏松 类脂 极少 脂多糖 G+与G-菌的细胞壁的特征比较 2、革兰氏染色的操作步骤 * 步骤: 结果: 阳性菌——蓝色 阴性菌——红色 结晶紫初染 碘液媒染 乙醇脱色 番红复染 涂片固定 革兰氏染色的具体步骤 试剂:草酸铵结晶紫、碘液、脱色乙醇、复红 流程: 玻片准备→取菌及涂片→干燥→固定→结晶紫初染1min→水洗→碘液媒染1min→水洗→无水乙醇脱色→水洗→复红复染1min→水洗→干燥→镜检。 1 2 3 4 ? 结晶紫 碘液 酒精 复红 注意事项: (1)载玻片要洁净无油迹。 (2)涂片时,滴水不要过多;在涂片时不可过厚,否则在染色脱色时,都不易均匀 (3)固定时,不可过热,以载玻片不烫手为宜。 (4)严格掌握脱色程度,是革兰氏染色的关键步骤。如脱色时间太长,阳性菌会误为革兰氏阴性菌,时间不足,革兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 (5)在镜检时,以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 (
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