微生物学综合09课件.pptVIP

* 1凝集反应Agglutination 　颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应（Agglutination reaction）。其中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。在该反应中，因为单位体积抗体量大，做定量实验时，应稀释抗体。 * １）直接凝集反应 颗粒性抗原如细菌和细胞与相应抗体直接结合所出现的反应，称为直接凝集反应 Direct agglution reaction 。 * a.玻片凝集法 　是一种常规的定性试验方法。原理是用已知抗体来检测未知抗原。常用于鉴定菌种、血型。如将含有白叶枯病菌抗体的血清与待检菌液各一滴，在玻片上混匀，数分种后若出现肉眼可见的凝集块，即为阳性反应，证明该菌是痢疾杆菌。此法快速、简便，但不能进行定量测定 * 一种塑料试验板 * b.试管凝集法 是一种定量试验方法。多用已知抗原来检测血清中有无相应抗体及其效价。因为要测定抗体的含量，故将待检查的血清用等渗盐水倍比稀释成不同浓度，然后加入等量抗原，37℃，2—4小时后观察，血清最高稀释度仍有明显凝集现象的，为该抗血清的凝集效价。 * 试管凝集法示意图 * c. Microtiter Agglutination微皿板（96孔板）凝集法 1 Microtiter plates are plastic and usually contain 96 wells2 More efficient way to do assay – as opposed to tubes * 微皿板凝集法示意图 * ２）间接凝集反应 　将可溶性抗原（抗体）先吸附在一种与免疫无关的，颗粒状微球表面，然后与相应抗体（抗原）作用，在有电解质存在的条件下，即可发生凝集，称为间接凝集反应 Indirect agglutination 。 由于载体增大了可溶性抗原的反应面积。当载体上有少量抗原与抗体结合。就出现肉眼可见的反应，敏感性很高。 * 2、沉淀反应 　可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（Precipitation）。反应中的抗原称为沉淀原，抗体为沉淀素。 由于在单位体积内抗原量大，为了不使抗原过剩，故应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。 　　 * １）环状沉淀反应： 是一种定性试验方法，可用已知抗体检测未知抗原。将已知抗体注入特制小试管中，然后沿管壁徐徐加入等量抗原，如抗原与抗体对应，则在两液界面出现白色的沉淀圆环。 * 环状沉淀反应示意图 * ２）絮状沉淀反应： 将已知抗原与抗体在试管（如凹玻片）内混匀，如抗原抗体对应，而又二者比例适当时，会出现肉眼可见的絮状沉淀，此为阳性反应。 * 四、实用血清学检测方法 除上述玻片凝集法、环状沉淀法外最常用的有琼脂扩散法、ELISA、免疫电泳法和免疫荧光法 * 1、琼脂扩散法 利用可溶性抗原抗体在半固体琼脂内扩散，若抗原抗体对应，且二者比例合适，在其扩散的某一部分就会出现白色的沉淀线。每对抗原抗体可形成一条沉淀线。有几对抗原抗体，就可分别形成几条沉淀线。 琼脂扩散可分为单向扩散和双向扩散两种类型。 单向扩散是一种定量试验。可用于免疫蛋白含量的测定。 而双向扩散多用于定性试验。由于方法简便易行，常用于测定分析和鉴定复杂的抗原成分。 * 琼脂单扩散试验示意图 * 琼脂双扩散试验示意图 * 琼脂双扩散试验结果 * Agar gel diffusion test 左图示抗体与样本都起反应 右图示抗体只与一个样本反应 * 2、 ELISA enzyme linked immuno-sorbent assay 酶联免疫吸附实验 1 One of the most sensitive reactions 2 Easy to set up and run3 Commonly used in diagnostic applications * ㈢．现代免疫标记技术 免疫标记技术（immunolabelling technique）：是将抗原或抗体用荧光素、酶、放射性同位素或电子致密物质等加入标记，借以提高其灵敏度的一类新技术 优点：特异性强，灵敏度高，应用范围广，反应速度快，易观察，能定性、定量、定位 * 酶免疫测定（enzyme immunoassay,EIA） 又叫免疫酶联法，用酶标记的抗体或抗抗体来进行抗原抗体反应的技术 酶标抗体或抗抗体进行抗原抗体反应后，用酶的特殊底物处理标本，由于酶的催化作用，可使原来无色的底物通过反应而显示颜色 优点： ①反应产生的颜色，可用肉眼或普通光镜观察 ②标本经酶标抗体染色后，还可用其它染料复染： ③特异性强 ； ④灵