05版微生物限度检查法课件.pptVIP

中国药典2005版微生物限度 检查法 前言 ●微生物限度检查在环境的洁净度10000级和局部100级的单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无菌操作，以防再污染。单向流空气区域、工作台面及环境必须定期按国家《医药工业洁净室 区 悬浮粒子、浮游菌和沉降菌测试方法》现行标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。 一般随机抽样不少于检验用量（2个以上最小包装）的3倍量。 ●检验量 指供试品一次检验的用量。一般为10g或10ml；化学药膜剂为100cm2；贵重或微量包装的药品可酌减（不得少于3g）。检查沙门菌的供试品其检验量增加10g或10ml。 ●供试液的制备 用pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制备供试液或选用适宜的乳化剂、分散剂、中和剂制备供试液；其用量应验证，在该检验条件无抗菌作用。供试液制备妥后不得超过1h就加入检验用培养基。 ●非水溶性膜剂供试品 化学药膜剂取100cm2，剪碎，加100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，浸泡，振摇，作供试液。一部中药膜剂取50 cm2，剪碎，适量的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液（50或100ml）浸泡，振摇，以供试品浸液为供试液。（SOP 2000版规定:中药膜剂取30~50cm2 ，剪碎，加水100ml）。 ●肠溶及结肠溶制剂 供试品10g，加100ml pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（肠溶制剂）或pH7.6无菌磷酸盐缓冲液（结肠制剂）,于45℃水浴振摇，使溶解。 ●气雾剂、喷雾剂供试品 取规定量供试品，置冷冻室冷冻1h，取出，迅速消毒供试品开启部位周围，用无菌钢锥钻一小孔，放置室温并轻轻转动容器，使抛射剂全部抛出。以无菌注射器吸出全部药液，按标示量加稀释剂至足量（若含非水溶性成份，加适量无菌聚山梨酯-80液），使均匀，取相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1∶10的供试液。 具抑菌活性的供试品 当供试品具有抑菌活性时，应将供试液中的抑菌活性消除后，方能依法检查。常用的方法有： ①培养基稀释法 取规定量的供试液，至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少至不具抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时，取同稀释级2ml供试液等量分注多个平皿，按浇碟法操作，培养、计数。每1ml供试液所注各平皿生长的菌数之和即为1ml的菌落数，取平均菌落数乘以稀释倍数的值按菌数报告规则报告菌数。 控制菌检查时，可加大增菌培养基的用量。 ②离心沉淀集菌法 取规定量的供试液，3000转/分离心20min（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5min，取全部上清液再离心），弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释剂至原规定量。 ③薄膜过滤法 采用开放式薄膜过滤器。 ④中和法 凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试品，可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。中和剂或灭活剂可加在所用的稀释剂或培养基中。 对药品进行微生物限度检查法时，首先应进行检 测方法的验证。如细菌、霉菌及酵母菌计数方法的 验证，以确认该计数方法是否科学、准确、客观。 若供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检 验结果时，计数方法应重新验证。验证时，按供试 液的制备，细菌、霉菌和酵母菌计数所规定的方法 及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行 验证。 菌株 大肠埃希菌CMCC（B）44102、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、 枯草芽孢杆菌、CMCC（B）63501白色念株菌CMCC F 98001、 黑曲霉菌CMCC F 98003 。 菌液制备 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种营养肉汤，白色念株菌接种真菌培养基、黑曲霉接种真菌培养基斜面，置规定温度、时间，培养。取培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成1ml含50~100cfu的菌液。 试验组 取规定量最低稀释级的供试液1ml，和50~100cfu试验菌，每株菌做2个平板，按平板菌落计数方法测定其菌数。采用薄膜过滤法计数时，最后一次冲洗液中加入50-100cfu，过滤，培养，计数。 菌液组 测定加入的试验菌液的菌数。 供试品对照组 取规定量的供试液，按平板法测定供试品稀释液本底的菌数。 稀释剂对照组 取稀释液，加入试验菌，使菌浓度为每1ml 供试液含50~100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。 验证试验应独立平行进行3次，分别计算各次试验菌的回收率。 结果判断 在三次平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应大于70%。若试验组的菌回收率均大于70%，符合验证试验，可按此方法测定细菌、霉菌和酵母菌数；若任一次平行试验中试验组的菌回收率均小于70%，不符号验证试验，应采用培养基稀释法、离心集菌法、过滤法、中